引用本文： 康博雄, 李海龙, 陈彻, 马焌峰, 樊勇, 王琛. miR-106a-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及其调控靶基因信号通路富集分析. 中国普外基础与临床杂志, 2018, 25(8): 923-928. doi: 10.7507/1007-9424.201712042 复制
胃癌是全球高发的恶性肿瘤之一，据国家癌症中心 2015 年统计，胃癌在我国恶性肿瘤死亡排名第 3 位[1]。胃癌的防控形势严峻，不断探索发现在胃癌中有明显临床意义和生物学功能的肿瘤标志物是防控胃癌的重要一环。MicroRNAs（miRNAs）是一类普遍存在于动植物体内的长约 19～25 nt 非编码单链小分子 RNA，通过与靶 mRNA 不完全结合，抑制靶基因的转录或翻译发挥其生物学功能。有研究[2]证实，miRNA 与胃癌的发生、发展、侵袭、转移及化疗药物耐药相关，是潜在的有价值的肿瘤标志物。相关研究指出，miR-106a 在多种肿瘤如宫颈癌[3]、卵巢癌[4]、前列腺癌[5]、肺癌[6]、食管癌[7]、结肠癌[8]、乳腺癌[9]及神经胶质瘤[10]中高表达，并与肿瘤生物学行为密切相关。在胃癌研究[11-12]中，胃癌组织中 miR-106a 的表达高于癌旁组织，并且其与肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移及 TNM 分期密切相关[13]。但比较不同作者的研究报道发现， miR-106a 在胃癌组织中的表达与临床病理特征并不一致，并且其临床意义研究和在不同分化程度的胃癌细胞中的表达甚至其调控的靶点和参与调控的信号通路缺少系统的分析和研究。miR-106a-5p 是 miR-106a的剪切成熟体，本研究对其在胃癌细胞和胃癌组织中的表达情况进行检测并进行临床病理参数分析和生物信息学分析，以期为胃癌的分子标志物和靶向治疗研究提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株
永生化正常胃黏膜上皮细胞 GES-1 和不同分化程度的胃癌细胞 AGS（高分化）、MKN-28（中分化）、HGC-27（未分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）、MKN-45（中分化）及 SGC-7901（中分化），其中 MKN-28 及 GES-1 购自上海和元生物公司，AGS、HGC-27、MGC-803 及 BGC-823 购自中科院上海细胞库、MKN-45 及 SGC-7901 购自北京协和肿瘤研究所细胞库。
1.2 临床病例
1.2.1 胃癌患者纳入和排除标准
纳入标准：① 经病理组织学活检确诊为胃癌；② 术前未行放化疗或全身治疗；③ 无严重其他系统疾患；④ 有完整的临床资料。排除标准：① 胃良性疾病，如胃溃疡、胃腺瘤或腺瘤性息肉、胃巨大皱襞症等以及胃部其他恶性肿瘤，如胃恶性淋巴瘤、胃间质瘤、胃神经内分泌肿瘤等；② 有肝转移者需与原发性肝癌相鉴别；③ 其他肿瘤病史、术前行化疗或放疗等辅助治疗的患者，且均无严重的肝肾功能损伤。
1.2.2 病例资料
收集 2015 年 10 月至 2017 年 4 月期间兰州大学第二医院接受手术治疗的 58 例胃癌患者作为研究对象，取其胃癌及其相应的癌旁组织（距离癌灶 5 cm 以上且经 HE 染色证实均无癌细胞）组成配对样本进行研究。术中取材，立即放入液氮中保存后转入–80 ℃ 长期保存。58 例患者中男 33 例，女 25 例，男女比例为 1.3∶1；年龄 35～76 岁，中位年龄为 56 岁。所有患者术前均未接受过放、化疗。TNM 分期以 UICC/AJCC TNM 病理分期第 8 版为标准。
1.3 试剂和仪器
高糖 DMEM 培养基（健顺生物科技有限公司），胎牛血清（杭州四季青公司）。超微量分光光度计（GE healthcare 公司）；实时定量 PCR 仪（美国 BIO-RAD 公司，CFX96）。所用逆转录试剂盒（All-in-OneTM miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit）、内参 U6 引物（引物序列编号：HmiRQP9001）、miRNA 特异引物（引物序列编号：HmiRQP0026）和通用引物均由广州复能基因公司提供。
1.4 实验方法
1.4.1 细胞培养
用含 10% 胎牛血清的高糖 DMEM，加入青霉素（100 U/mL）和链霉素（100 mg/mL），在 37 ℃、5% CO2 的细胞培养箱中常规培养细胞。每隔 2～3 d 换完全培养基，待细胞密度达 90% 左右时按 1∶2 比例传代，取对数生长期的细胞用于下一步实验。
1.4.2 实时荧光定量 PCR 检测
采用荧光定量 PCR 法检测不同分化程度胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、MKN-28、MGC-803、BGC-823 及 HGC-27 与永生化正常胃黏膜上皮细胞 GES-1 中 miR-106a-5p 的表达量。采用 Trizol 试剂从细胞和临床样本组织中提取总 RNA，按照操作说明书完成 RNA 提取后进行加尾反应和逆转录反应，反应条件如下：37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 s；所获取的模板稀释后用于后续的 PCR 扩增反应。PCR 反应条件：预变性 95 ℃ 10 s，变性 95 ℃ 10 s，退火 60 ℃ 20 s，40 个循环。扩增反应结束后进行溶解曲线分析，判断产物是否有非特异性扩增；分析扩增曲线，计算 Ct 值，以 U6 作为内参基因，通过 2–ΔΔCt 法计算 GES-1 和不同分化程度的胃癌细胞间、胃癌组织与癌旁组织间 mir-106a-5p 的表达差异，实验重复 3 次。其中，对于胃癌细胞，以 GES-1 中目标基因的表达量为 1，观察不同分化程度的胃癌细胞中目标基因的差异倍数；对于临床样本组织，以癌旁组织中目标基因表达量为 1，观察在胃癌组织与癌旁组织间的表达差异倍数。相对表达量取对数。
1.4.3 miRNA 靶基因预测和靶基因富集信号通路分析
使用 mirWALK 2.0 网站（http://zmf.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk/index.html）的集成生物信息学软件对 miR-106a-5p 的靶基因进行预测分析，用 DAVID 6.7 软件（https://david.ncifcrf.gov/）进行京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析[14]。
1.5 统计学方法
应用 SPSS 17.0 统计软件对数据进行分析，计数资料采用卡方检验，正态分布的计量资料，2 组间比较采用配对 t 检验，多组间采用单因素方差分析，检验水准 α=0.050。基因富集聚类分析结果采用 Fisher 检验，检验水准 α=0.050。
2 结果
2.1 不同细胞中 miR-106a-5p 的相对表达量
相对于正常胃黏膜上皮细胞 GES-1，miR-106a-5p 在不同分化程度的胃癌细胞 HGC-27、MKN-45、BGC-823、MGC-803、SGC-7901及AGS中的表达量均明显上调（P<0.010 或P<0.001），而在 MKN-28 细胞中未见上调（P>0.050）。见图 1。
图1
miR-106a-5p 在不同细胞中的相对表达量
与 GES-1 细胞比较，*
2.2 胃癌组织及其相应的癌旁组织中 miR-106a-5p 的表达以及其与临床病理特征的关系
2.2.1 胃癌组织及其相应的癌旁组织中 miR-106a-5p 的表达结果
以癌旁组织表达量为 1，miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达量在 36 例中表达上调（即高表达），在 18 例中表达下调（即低表达），4 例变化不明显，见图 2。
图2
miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达结果
a：频数分布图；b：表达量散点图
2.2.2 胃癌组织中 miR-106a-5p 表达与胃癌患者临床病理特征的关系
miR-106a-5p 在胃癌组织中表达与淋巴结转移（P=0.003）和肿瘤浸润深度（P=0.034）有关，即 miR-106a-5p 在胃癌组织中高表达患者中发生淋巴结转移和肿瘤穿透浆膜层的比例更大；而与胃癌患者的年龄、性别、组织学分化程度、TNM 分期、淋巴管侵犯、血管侵犯及 Borrmann 分型无关（P>0.050），见表 1。
表1
miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达与胃癌患者临床病理特征的关系
2.3 miR-106a-5p 的靶基因预测和生物信息学分析结果
miR-106a-5p 的靶基因预测和生物信息学分析结果发现，miR-106a-5p 的预测靶基因富集在 94 个信号通路中，其中与肿瘤有密切关系的有 31 个（表 2），FoxO 信号通路、凋亡、转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β 信号通路、p53 信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路、Wnt 信号通路、Hippo 信号通路、磷脂酰肌醇3激酶（ phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B，PKB-Akt）信号通路、细胞周期、ErbB 信号通路及趋化因子信号通路均参与了与肿瘤细胞凋亡、细胞周期、增殖、代谢、侵袭及转移的生物学行为。
表2
miR-106a-5p 的靶基因富集信号通路分析结果
3 讨论
人类 miR-106a（MIMAT0000103）属于 miR-17 家族，位于人类染色体 Xq26.2。miR-106a-5p 是其剪切成熟体，序列为 AAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG。研究[5-13]表明，包括 miR-106a 在内的 miR-17 家族成员在多种人类肿瘤组织中普遍高表达，并作为癌基因在肿瘤的发生及发展中发挥广泛的作用。
本研究发现，相对于正常胃黏膜上皮细胞 GES-1，miR-106a-5p 在不同分化程度的胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-45 及 HGC-27 中的表达量均明显高表达；在临床病例中发现，相对于相应的癌旁组织，miR-106a-5p 在胃癌组织中高表达 36 例，临床病理特征分析结果发现，miR-106a-5p 在胃癌组织中的高表达与淋巴结转移及浸润深度有关（P<0.050），而与胃癌患者的年龄、性别、组织学分化程度、TNM 分期、淋巴管侵犯、血管侵犯及 Borrmann 分型无关。本组病例资料来自甘肃省胃癌高发地区[15]，样本具有一定的代表性，本研究结果与其他的研究报道结论基本一致。结果提示，miR-106a-5p 是与胃癌淋巴结转移及浸润深度有关的高表达癌基因，值得深入探讨其功能。
miRNA 调控下游靶基因往往通过调控转录后翻译或造成 mRNA 降解实现。有研究[11, 16-23]表明，下调 miR-106a 可以抑制胃癌细胞增殖和细胞体外成瘤能力，其功能可与靶向调控金属蛋白酶组织抑制剂 2、脂肪酸合酶、PAK5、PTEN、HMGA2、IRS-2、FASTK、RUNX3、E2F1 基因的表达来实现。然而，更多的靶基因仍需预测并通过实验验证以充分阐明 miR-106a 的功能。因此，为分析 miR-106a的剪切成熟体miR-106a-5p 的功能，本研究借助于公认的 miRNA 靶基因预测数据库 mirWALK 和信号通路富集分析数据库 DAVID 6.7 进行生物信息学预测和分析，结果发现，miR-106a-5p 的预测靶基因富集在 94 个信号通路中，其中与肿瘤有密切关系的有 31 个，涉及多种肿瘤凋亡、细胞周期、增殖、代谢、侵袭转移以及多个关键的信号通路。从预测靶基因的功能和富集信号通路分析看，miR-106a-5p 是与肿瘤多种生物学行为关系密切的信号通路，因此，分析其靶基因参与的信号通路有助于理解其调控的生物学行为的分子机制；另外，理解 miR-106a-5p 所参与的淋巴结转移以及浸润深度的分子机制，则宜从预测的靶基因富集的信号通路、TGF-β 信号通路、PI3K-Akt 信号通路、ErbB 信号通路及趋化因子信号通路入手进行分析研究。
先前有文献[24]报道，胃癌患者血浆中 miR-106a 的表达量高于健康对照组，且与胃癌的 TNM 分期和淋巴结转移有关，随着 TNM 分期的增加，miR-106a 的相对表达量增加。Tsujiura 等[25]也报道胃癌患者血浆中 miR-106a 和 miR-106b 的表达显著高于健康对照组。Wang 等[26]报道，胃癌患者血清中 miR-106a 的表达显著高于正常对照组，受试者操作特征曲线下线面积为 0.895 ［95% 可信区间为（0.846，0.943）］，其诊断价值特异性和敏感性分别为 93.8% 和 77.5%。以上结果提示，miR-106a 极有可能成为对侵袭、转移进行预测的分子标志物；血清 miR-106a 来自胃癌组织的分泌，同样是胃癌生物学行为的体现，同步开展肿瘤组织和血清中 miRNA 的表达和相关性研究是肿瘤标志物研究的重要环节，有待未来进一步开展工作。
综上所述，miR-106a-5p 是一个在胃癌中高表达的癌基因，其临床病理特征分析和生物信息学分析均提示其是胃癌发病和进展中与淋巴结转移及浸润深度密切相关的分子标志物。虽然本组资料所显示的 miR-106a-5p 表达与胃癌患者临床病理特征的关系可能与其他文献[13]报道并不完全一致，其差异或与临床样本选择造成的偏倚有关，但仍值得进一步深入研究。
胃癌是全球高发的恶性肿瘤之一，据国家癌症中心 2015 年统计，胃癌在我国恶性肿瘤死亡排名第 3 位[1]。胃癌的防控形势严峻，不断探索发现在胃癌中有明显临床意义和生物学功能的肿瘤标志物是防控胃癌的重要一环。MicroRNAs（miRNAs）是一类普遍存在于动植物体内的长约 19～25 nt 非编码单链小分子 RNA，通过与靶 mRNA 不完全结合，抑制靶基因的转录或翻译发挥其生物学功能。有研究[2]证实，miRNA 与胃癌的发生、发展、侵袭、转移及化疗药物耐药相关，是潜在的有价值的肿瘤标志物。相关研究指出，miR-106a 在多种肿瘤如宫颈癌[3]、卵巢癌[4]、前列腺癌[5]、肺癌[6]、食管癌[7]、结肠癌[8]、乳腺癌[9]及神经胶质瘤[10]中高表达，并与肿瘤生物学行为密切相关。在胃癌研究[11-12]中，胃癌组织中 miR-106a 的表达高于癌旁组织，并且其与肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移及 TNM 分期密切相关[13]。但比较不同作者的研究报道发现， miR-106a 在胃癌组织中的表达与临床病理特征并不一致，并且其临床意义研究和在不同分化程度的胃癌细胞中的表达甚至其调控的靶点和参与调控的信号通路缺少系统的分析和研究。miR-106a-5p 是 miR-106a的剪切成熟体，本研究对其在胃癌细胞和胃癌组织中的表达情况进行检测并进行临床病理参数分析和生物信息学分析，以期为胃癌的分子标志物和靶向治疗研究提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株
永生化正常胃黏膜上皮细胞 GES-1 和不同分化程度的胃癌细胞 AGS（高分化）、MKN-28（中分化）、HGC-27（未分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）、MKN-45（中分化）及 SGC-7901（中分化），其中 MKN-28 及 GES-1 购自上海和元生物公司，AGS、HGC-27、MGC-803 及 BGC-823 购自中科院上海细胞库、MKN-45 及 SGC-7901 购自北京协和肿瘤研究所细胞库。
1.2 临床病例
1.2.1 胃癌患者纳入和排除标准
纳入标准：① 经病理组织学活检确诊为胃癌；② 术前未行放化疗或全身治疗；③ 无严重其他系统疾患；④ 有完整的临床资料。排除标准：① 胃良性疾病，如胃溃疡、胃腺瘤或腺瘤性息肉、胃巨大皱襞症等以及胃部其他恶性肿瘤，如胃恶性淋巴瘤、胃间质瘤、胃神经内分泌肿瘤等；② 有肝转移者需与原发性肝癌相鉴别；③ 其他肿瘤病史、术前行化疗或放疗等辅助治疗的患者，且均无严重的肝肾功能损伤。
1.2.2 病例资料
收集 2015 年 10 月至 2017 年 4 月期间兰州大学第二医院接受手术治疗的 58 例胃癌患者作为研究对象，取其胃癌及其相应的癌旁组织（距离癌灶 5 cm 以上且经 HE 染色证实均无癌细胞）组成配对样本进行研究。术中取材，立即放入液氮中保存后转入–80 ℃ 长期保存。58 例患者中男 33 例，女 25 例，男女比例为 1.3∶1；年龄 35～76 岁，中位年龄为 56 岁。所有患者术前均未接受过放、化疗。TNM 分期以 UICC/AJCC TNM 病理分期第 8 版为标准。
1.3 试剂和仪器
高糖 DMEM 培养基（健顺生物科技有限公司），胎牛血清（杭州四季青公司）。超微量分光光度计（GE healthcare 公司）；实时定量 PCR 仪（美国 BIO-RAD 公司，CFX96）。所用逆转录试剂盒（All-in-OneTM miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit）、内参 U6 引物（引物序列编号：HmiRQP9001）、miRNA 特异引物（引物序列编号：HmiRQP0026）和通用引物均由广州复能基因公司提供。
1.4 实验方法
1.4.1 细胞培养
用含 10% 胎牛血清的高糖 DMEM，加入青霉素（100 U/mL）和链霉素（100 mg/mL），在 37 ℃、5% CO2 的细胞培养箱中常规培养细胞。每隔 2～3 d 换完全培养基，待细胞密度达 90% 左右时按 1∶2 比例传代，取对数生长期的细胞用于下一步实验。
1.4.2 实时荧光定量 PCR 检测
采用荧光定量 PCR 法检测不同分化程度胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、MKN-28、MGC-803、BGC-823 及 HGC-27 与永生化正常胃黏膜上皮细胞 GES-1 中 miR-106a-5p 的表达量。采用 Trizol 试剂从细胞和临床样本组织中提取总 RNA，按照操作说明书完成 RNA 提取后进行加尾反应和逆转录反应，反应条件如下：37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 s；所获取的模板稀释后用于后续的 PCR 扩增反应。PCR 反应条件：预变性 95 ℃ 10 s，变性 95 ℃ 10 s，退火 60 ℃ 20 s，40 个循环。扩增反应结束后进行溶解曲线分析，判断产物是否有非特异性扩增；分析扩增曲线，计算 Ct 值，以 U6 作为内参基因，通过 2–ΔΔCt 法计算 GES-1 和不同分化程度的胃癌细胞间、胃癌组织与癌旁组织间 mir-106a-5p 的表达差异，实验重复 3 次。其中，对于胃癌细胞，以 GES-1 中目标基因的表达量为 1，观察不同分化程度的胃癌细胞中目标基因的差异倍数；对于临床样本组织，以癌旁组织中目标基因表达量为 1，观察在胃癌组织与癌旁组织间的表达差异倍数。相对表达量取对数。
1.4.3 miRNA 靶基因预测和靶基因富集信号通路分析
使用 mirWALK 2.0 网站（http://zmf.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk/index.html）的集成生物信息学软件对 miR-106a-5p 的靶基因进行预测分析，用 DAVID 6.7 软件（https://david.ncifcrf.gov/）进行京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析[14]。
1.5 统计学方法
应用 SPSS 17.0 统计软件对数据进行分析，计数资料采用卡方检验，正态分布的计量资料，2 组间比较采用配对 t 检验，多组间采用单因素方差分析，检验水准 α=0.050。基因富集聚类分析结果采用 Fisher 检验，检验水准 α=0.050。
2 结果
2.1 不同细胞中 miR-106a-5p 的相对表达量
相对于正常胃黏膜上皮细胞 GES-1，miR-106a-5p 在不同分化程度的胃癌细胞 HGC-27、MKN-45、BGC-823、MGC-803、SGC-7901及AGS中的表达量均明显上调（P<0.010 或P<0.001），而在 MKN-28 细胞中未见上调（P>0.050）。见图 1。
图1
miR-106a-5p 在不同细胞中的相对表达量
与 GES-1 细胞比较，*
2.2 胃癌组织及其相应的癌旁组织中 miR-106a-5p 的表达以及其与临床病理特征的关系
2.2.1 胃癌组织及其相应的癌旁组织中 miR-106a-5p 的表达结果
以癌旁组织表达量为 1，miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达量在 36 例中表达上调（即高表达），在 18 例中表达下调（即低表达），4 例变化不明显，见图 2。
图2
miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达结果
a：频数分布图；b：表达量散点图
2.2.2 胃癌组织中 miR-106a-5p 表达与胃癌患者临床病理特征的关系
miR-106a-5p 在胃癌组织中表达与淋巴结转移（P=0.003）和肿瘤浸润深度（P=0.034）有关，即 miR-106a-5p 在胃癌组织中高表达患者中发生淋巴结转移和肿瘤穿透浆膜层的比例更大；而与胃癌患者的年龄、性别、组织学分化程度、TNM 分期、淋巴管侵犯、血管侵犯及 Borrmann 分型无关（P>0.050），见表 1。
表1
miR-106a-5p 在胃癌组织中的表达与胃癌患者临床病理特征的关系
2.3 miR-106a-5p 的靶基因预测和生物信息学分析结果
miR-106a-5p 的靶基因预测和生物信息学分析结果发现，miR-106a-5p 的预测靶基因富集在 94 个信号通路中，其中与肿瘤有密切关系的有 31 个（表 2），FoxO 信号通路、凋亡、转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β 信号通路、p53 信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路、Wnt 信号通路、Hippo 信号通路、磷脂酰肌醇3激酶（ phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B，PKB-Akt）信号通路、细胞周期、ErbB 信号通路及趋化因子信号通路均参与了与肿瘤细胞凋亡、细胞周期、增殖、代谢、侵袭及转移的生物学行为。
表2
miR-106a-5p 的靶基因富集信号通路分析结果
3 讨论
人类 miR-106a（MIMAT0000103）属于 miR-17 家族，位于人类染色体 Xq26.2。miR-106a-5p 是其剪切成熟体，序列为 AAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG。研究[5-13]表明，包括 miR-106a 在内的 miR-17 家族成员在多种人类肿瘤组织中普遍高表达，并作为癌基因在肿瘤的发生及发展中发挥广泛的作用。
本研究发现，相对于正常胃黏膜上皮细胞 GES-1，miR-106a-5p 在不同分化程度的胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-45 及 HGC-27 中的表达量均明显高表达；在临床病例中发现，相对于相应的癌旁组织，miR-106a-5p 在胃癌组织中高表达 36 例，临床病理特征分析结果发现，miR-106a-5p 在胃癌组织中的高表达与淋巴结转移及浸润深度有关（P<0.050），而与胃癌患者的年龄、性别、组织学分化程度、TNM 分期、淋巴管侵犯、血管侵犯及 Borrmann 分型无关。本组病例资料来自甘肃省胃癌高发地区[15]，样本具有一定的代表性，本研究结果与其他的研究报道结论基本一致。结果提示，miR-106a-5p 是与胃癌淋巴结转移及浸润深度有关的高表达癌基因，值得深入探讨其功能。
miRNA 调控下游靶基因往往通过调控转录后翻译或造成 mRNA 降解实现。有研究[11, 16-23]表明，下调 miR-106a 可以抑制胃癌细胞增殖和细胞体外成瘤能力，其功能可与靶向调控金属蛋白酶组织抑制剂 2、脂肪酸合酶、PAK5、PTEN、HMGA2、IRS-2、FASTK、RUNX3、E2F1 基因的表达来实现。然而，更多的靶基因仍需预测并通过实验验证以充分阐明 miR-106a 的功能。因此，为分析 miR-106a的剪切成熟体miR-106a-5p 的功能，本研究借助于公认的 miRNA 靶基因预测数据库 mirWALK 和信号通路富集分析数据库 DAVID 6.7 进行生物信息学预测和分析，结果发现，miR-106a-5p 的预测靶基因富集在 94 个信号通路中，其中与肿瘤有密切关系的有 31 个，涉及多种肿瘤凋亡、细胞周期、增殖、代谢、侵袭转移以及多个关键的信号通路。从预测靶基因的功能和富集信号通路分析看，miR-106a-5p 是与肿瘤多种生物学行为关系密切的信号通路，因此，分析其靶基因参与的信号通路有助于理解其调控的生物学行为的分子机制；另外，理解 miR-106a-5p 所参与的淋巴结转移以及浸润深度的分子机制，则宜从预测的靶基因富集的信号通路、TGF-β 信号通路、PI3K-Akt 信号通路、ErbB 信号通路及趋化因子信号通路入手进行分析研究。
先前有文献[24]报道，胃癌患者血浆中 miR-106a 的表达量高于健康对照组，且与胃癌的 TNM 分期和淋巴结转移有关，随着 TNM 分期的增加，miR-106a 的相对表达量增加。Tsujiura 等[25]也报道胃癌患者血浆中 miR-106a 和 miR-106b 的表达显著高于健康对照组。Wang 等[26]报道，胃癌患者血清中 miR-106a 的表达显著高于正常对照组，受试者操作特征曲线下线面积为 0.895 ［95% 可信区间为（0.846，0.943）］，其诊断价值特异性和敏感性分别为 93.8% 和 77.5%。以上结果提示，miR-106a 极有可能成为对侵袭、转移进行预测的分子标志物；血清 miR-106a 来自胃癌组织的分泌，同样是胃癌生物学行为的体现，同步开展肿瘤组织和血清中 miRNA 的表达和相关性研究是肿瘤标志物研究的重要环节，有待未来进一步开展工作。
综上所述，miR-106a-5p 是一个在胃癌中高表达的癌基因，其临床病理特征分析和生物信息学分析均提示其是胃癌发病和进展中与淋巴结转移及浸润深度密切相关的分子标志物。虽然本组资料所显示的 miR-106a-5p 表达与胃癌患者临床病理特征的关系可能与其他文献[13]报道并不完全一致，其差异或与临床样本选择造成的偏倚有关，但仍值得进一步深入研究。
