引用本文： 唐剑伟, 徐明清, 张鸣. miR-200a 与肝细胞癌增殖转移及预后关系的研究进展. 中国普外基础与临床杂志, 2018, 25(9): 1130-1134. doi: 10.7507/1007-9424.201802035 复制
肝细胞癌（HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在全球肿瘤致死率中位居第 5 位[1]。因其早期症状不明显且缺乏有效的检测方法，因此早期诊断率较低，大约有 30% 的 HCC 患者在诊断时已为晚期[2]，失去有效的治疗机会。同时，由于非早期 HCC 治疗后转移及复发率高，早期诊断治疗具有更突出的重要价值。微小 RNA（miRNA，miR）是一种广泛参与机体多种生物学功能的非编码 RNA，它主要与靶 RNA 的 3´ 端非翻译区（untranslated region，UTR）结合，导致靶 RNA 的降解或翻译终止，从而参与调控细胞发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程。而 miRNA 异常表达与多种疾病，以及肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等密切相关[3-4]。一些 miRNA 已确定在肿瘤中发挥癌基因或抑癌基因的作用，并影响肿瘤的生物学行为[5-7]。其中，miR-200 家族与肿瘤的关系是近年来的研究热点，并取得了一定进展[8]，其家族成员之一—miR-200a 与 HCC 的发生、侵袭、转移、预后等诸多方面有密切关系。笔者现就 miR-200a 在 HCC 中的研究进展进行综述。
1 miR-200a 在 HCC 中的表达情况
miR-200 家族由 miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141 及 miR-429 组成。根据不同的染色体定位，分为 2 个亚组：miR-200a、miR-200b 及 miR-429 定位于染色体 1p36.33，miR-200c 和 miR-141 定位于染色体 12p13.31。根据功能差异可分为 2 个子家族[9-10]：具有相同核心序列“AAUACU”的 miR-200b、miR-200c 及 miR-429 为 1 个子家族，具有共同核心序列“AACACU”的 miR-200a 与 miR-141 为另 1 个子家族。
miR-200a 与大多数 miR 一样，具有基因簇集现象、时序性、组织特异性、高度保守等生物学特性，在不同肿瘤细胞系及组织中，miR-200a 的表达并不完全相同。Murakami 等[11]通过微阵列方法对 24 例 HCC 组织和 22 例 HCC 癌旁组织进行研究后发现，miR-200a 在 HCC 组织中呈低表达。Feng 等[12]应用定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）和原位杂交分析方法对 115 例 HCC 组织及其癌旁组织中 miR-200a 的表达进行检测后发现，它在癌组织中的表达水平明显降低，癌旁组织的表达水平是 HCC 组织的 2.36 倍，且 miR-200a 在不同的 HCC 细胞株（HepG2、SMMC7721、BEL7402、Huh7、HCCLM3、MHCC97L 和 PLC）中的表达水平也明显低于正常肝细胞株 LO2。Wang 等[13]发现，miR-200a 在 HCC 干细胞中的表达水平低于正常肝脏干细胞。Dhayat 等[14]通过 qRT-PCR 法对 22 例 HCC 术前患者、22 例肝硬变患者及 15 例健康志愿者的血清 miR-200a 的表达水平进行检测后发现，miR-200a 在 HCC 患者血清中的表达水平显著低于肝硬变患者与健康人。
2 miR-200a 抑制 HCC 细胞增殖
近年来研究[15]表明，miR-200a 在 HCC 组织及细胞中的表达下调，正常表达或者高表达的 miR-200a 可通过影响细胞的增殖周期或信号传导通路来抑制 HCC 细胞的增殖，促进肿瘤细胞凋亡，从而发挥抑癌作用。Xiao 等[16]通过细胞增殖实验及平板克隆实验发现，转染 miR-200a 后的 HCC 细胞株（SK-HEP-1 和 Huh7）的细胞增殖速度明显低于对照组；进一步研究发现，miR-200a 通过作用于 CDK6 的 3´UTR 端，调控其介导的 Rb-E2F 传导通路，诱导肿瘤细胞停滞于 G1 期，从而发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。
有多位研究者研究了 miR-200a 抑制 HCC 细胞增殖的机制。Feng 等[12]首先证实了 miR-200a 对肝癌细胞的增殖具有抑制作用，通过 TargetScan 预测，结肠癌转移相关基因 1（metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1）可能是 miR-200a 的作用靶点，然后运用 qRT-PCR 和 Western blot 检测发现，高表达的 miR-200a 抑制 MACC1 mRNA 及其转录蛋白的表达，初步证明二者之间存在作用关联。该学者进一步进行了机制研究，荧光素酶活性实验显示：高表达的 miR-200a 作用于 MACC1 野生型 3´UTR 端，通过调控 MACC1 分子的表达而抑制细胞的增殖[12]。Chen 等[17]则从另一角度进行了研究，该研究团队使用慢病毒转染构建高表达 miR-200a 的 HCC 细胞株，通过细胞增殖实验发现，高表达组的细胞增殖率明显低于对照组（P<0.01）；进一步研究发现，miR-200a 可作用于叉头框转录因子 a2（Foxa2）的 3´UTR，miR-200a 表达的上调能抑制 Foxa2 基因 mRNA 及其转录蛋白的表达，从而抑制 HCC 细胞的增殖。
3 miR-200a 抑制 HCC 的侵袭转移
肿瘤细胞的侵袭转移是异常复杂的过程，研究[18]证实，miR-200a 能抑制 HCC 细胞的侵袭转移，其作用机制主要是通过抑制或逆转上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程来实现的。EMT 是肝细胞癌侵袭转移的关键过程之一，它的发生伴随着间质表型标志物的表达上调和上皮细胞标志物的表达下调，其中上皮细胞标志物 E-钙黏蛋白是 EMT 过程中最重要的标志物，其表达与 EMT 的发生及肿瘤侵袭转移能力呈负相关[19-21]。研究[22-23]表明，miR-200a 通过作用于锌指 E-盒结合同源异形盒（zinc finger E-boxbinding homeobox，ZEB）等靶基因 mRNA 的 3´UTR，下调其相应蛋白的表达，进而提高 E-钙黏蛋白的表达水平，抑制或逆转 EMT 过程，从而降低肿瘤细胞的侵袭和转移能力。
Hung 等[24]通过 Transwell 迁徙实验发现，高表达 miR-200a 对 HCC 细胞迁徙具有抑制作用。在 HCC 细胞株 Hep J5 与 skHep-1 中，上调 miR-200a 的表达可导致 EMT 标志蛋白——E-钙黏蛋白的表达上调，而使用 shRNA 沉默 miR-200a 基因后，E-钙黏蛋白的表达下调，提示 miR-200a 具有抑制 EMT 过程的作用。Dhayat 等[25]通过 qRT-PCR 分析发现，miR-200a 在 HCC 组织中的表达明显下调，相关性分析结果显示，miR-200a 的表达水平与间充质标志物波形蛋白和 ZEB-1 蛋白的表达水平呈负相关，与 E-钙黏蛋白的表达水平呈正相关。Zhong等[18]将 HCC 细胞株分为 miR-200a 低表达组与正常对照组，应用 qRT-PCR 和蛋白质印迹法分析对比了 2 组细胞株中 EMT 相关 mRNA 及蛋白的表达情况，结果显示，低表达组 E-钙黏蛋白 mRNA 的表达水平显著降低，相反波形蛋白及 Ki-67 蛋白的表达水平均明显升高。近年来，随着肿瘤干细胞研究的进展，也有研究[26]发现，miR-200a 可能也参与了肝癌干细胞 EMT 过程的调控。有研究[13]发现，通过转染上调肝癌干细胞中 miR-200a 的表达后，E-钙黏蛋白的表达水平显著升高，而间充质标志物 ZEB-2、N-钙黏蛋白及波形蛋白的表达水平明显降低，体外实验也证实转染后的肝癌干细胞的转移侵袭能力降低。
上述研究从不同方面证实了 miR-200a 主要通过抑制 EMT 介导的途径发挥作用，但同时还通过其他通路调控 HCC 细胞的侵袭转移。如前所述，Chen 等[17]应用 TargetScan 研究显示，Foxa2 是 miR-200a 的作用靶点，而 Foxa2 参与多种肿瘤的发生和发展[27]，miR-200a 通过作用于 Foxa2 的 3´UTR，下调其 mRNA 及蛋白的表达，使用慢病毒转染构建 miR-200a 高表达的肝细细胞株 Huh7 后，细胞迁移侵袭实验显示，高表达组的细胞侵袭能力低于对照组。另有研究者[28]运用质粒转染方法上调 miR-200a 在肝癌细胞株 MHCC97-H 和 SMMC-7721 中的表达后，细胞迁移实验结果提示，高表达的 miR-200a 对肝癌细胞的侵袭转移具有明显的抑制作用；随后进行体内实验，将 miR-200a 高表达的肝癌细胞株 SMMC-7721 注射在裸鼠皮下，发现高表达组裸鼠的肺转移率与转移结节数量均明显低于对照组（P<0.05）；再进一步运用生物信息学工具方法检测，发现接头蛋白 GAB1 可能为 miR-200a 的靶点；当使用 siRNA 敲低 GAB1 基因的内源性表达后，HCC 细胞的侵袭转移水平显著降低；荧光素酶活性实验也证实，miR-200a 正是作用于 GAB1 的 3´UTR，抑制了 GAB1 mRNA 及其蛋白的表达。该研究[28]表明，miR-200a 通过沉默 GAB1 的表达从而抑制 HCC 的侵袭转移，这是其另一条作用途径。
4 miR-200a 在 HCC 预后评估中的作用
miR-200a 在 HCC 细胞增殖和侵袭转移中具有重要作用，其表达情况是否可预测患者的预后呢？Xiao 等[16]通过对比了 56 例 miR-200a 高表达 HCC 患者与 65 例 miR-200a 低表达 HCC 患者术后的总体生存期发现，患者总体生存时间与 miR-200a 的表达水平、血清甲胎蛋白（AFP）水平、分化程度、TNM 分期及是否存在门静脉癌栓密切相关。亚组分析结果显示，miR-200a 低表达组的总体生存期较高表达组更短（P<0.01），说明低表达 miR-200a 对 HCC 的发展具有促进作用[16]。Liu 等[29]检测了 136 例行肝动脉化疗栓塞 HCC 患者术前血清中的 11 种 miRNA，发现 miR-200a、miR-21、miR-122 和 miR-224-5p 与患者术后的总体生存时间有关；多因素分析结果显示：高 AFP 水平、多卫星结节及 miR-200a 低表达是影响 HCC 介入术后患者总体生存时间的独立危险因素，且 miR-200a 表达水平对患者预后预测的准确性高于 AFP。龚哲等[30]分析了 95 例 HCC 患者血清及癌组织中 miR-200a 的表达情况，结果显示，肝癌组织中 miR-200a 的表达水平最低，癌旁组织次之，正常肝组织最高，且癌组织中 miR-200a 的表达水平与分化程度和远处转移相关；血清中 miR-200a 的表达水平与 AFP 水平、肿瘤分化程度、是否远处转移及 TNM 分期相关；高表达组和低表达组术后的 5 年累积生存率分别为 63.7% 和 41.9%，提示高表达组患者的术后生存明显好于低表达组。
在 HCC 行肝移植术的研究中，Feng 等[12]发现，miR-200a 的表达水平与预后密切相关，其中低表达组的 1、3 及 5 年复发率及存活率明显低于高表达组（总复发率：P<0.001；总生存率：P=0.037）；多因素分析发现，miR-200a 低表达是 HCC 肝移植术后患者复发的危险因素之一。
5 miR-200a 作为 HCC 血清学肿瘤标志物的潜在价值
AFP 联合影像学检查是目前应用得最广泛的 HCC 诊断方法[31]，但其存在一定的假阳性率，敏感性也有待于进一步提高[32]，探寻新的具有更好的诊断准确性及敏感性的 HCC 标志物，对提高 HCC 诊断的准确性，尤其是早期小肝癌的价值不言而喻。研究发现，某些 miRNAs 能在人类血清中稳定存在[33]，且这些 miRNAs 与肿瘤的发生发展、组织分型及分化程度密切相关，具有组织特异性，提示它们可作为诊断肿瘤的新的标志物[34-35]。
Wang 等[36]对 HCC 患者及健康志愿者血清中的 84 种 miRNA 进行检测后发现，有 18 种 miRNA 在 HCC 患者的血清中具有差异性表达，其中 miR-200a 在 HCC 患者血清中的表达降低。Dhayat 等[14]应用 qRT-PCR 法测定了 miR-200 成员在 HCC、肝硬变及健康志愿者血清中的表达，结果显示，HCC 患者血清中 miR-200a 和 miR-141 的表达水平明显低于健康对照组（P<0.007，P<0.002）；受试者工作特征（ROC）曲线提示血清中 miR-200a 和 miR-141 的差异性表达对肝癌、肝硬变患者和健康志愿者的鉴别有一定价值。汪建林等[37]通过检测 36 例 HCC 患者及 21 例健康人的血清中 miR-200a 的相对表达水平，并结合临床资料提出：miR-200a 的表达水平与患者年龄、性别、吸烟、饮酒、HBV 感染及肝硬变均无关，而与 AFP 水平、肿瘤分期及肿瘤病理分级均相关。其他学者[17]的研究也证实这一结论，并同时指出，HCC 患者血清中 miR-200a 的表达水平与肿瘤直径、TNM 分期、是否转移和复发均呈负相关，与分化程度呈正相关。通过对比 HCC 患者手术前后血清中 miR-200a 的表达水平发现，术后患者血清中 miR-200a 的表达水平较术前有明显升高[17]。以上研究结果为 miR-200a 用于 HCC 的术前诊断、术后随访、监测等提供了新的证据，但诊断可靠性仍需要更大样本量的研究进一步证实。
6 小结
miR-200 家族在肿瘤发生发展中的研究仍是目前研究领域的热点，研究[38-39]发现，miR-200a 与多种肝脏疾病的发生发展有着紧密的联系，如参与肝纤维化、肝损伤、HCC 等病理进程。它能明显抑制 HCC 细胞的增殖、侵袭和转移，发挥抑癌基因的作用。又因其在 HCC 组织、细胞及患者血清中的表达具有显著差异性，因此其可作为 HCC 诊断和预后的潜在标志物。由于 HCC 的发生和发展是多因素、多基因及多阶段的异常复杂的过程，miR-200a 仅仅是众多复杂因素之一，它与其他发生因素之间是否存在相互作用尚不清楚，仍然面临诸多疑问。相信随着 miR-200a 及其下游靶点研究的深入，miR-200a 对 HCC 发生、发展、侵袭和转移的调控机制将得到进一步阐明，可能为 HCC 诊断和靶向干预治疗提供新的途径。
肝细胞癌（HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在全球肿瘤致死率中位居第 5 位[1]。因其早期症状不明显且缺乏有效的检测方法，因此早期诊断率较低，大约有 30% 的 HCC 患者在诊断时已为晚期[2]，失去有效的治疗机会。同时，由于非早期 HCC 治疗后转移及复发率高，早期诊断治疗具有更突出的重要价值。微小 RNA（miRNA，miR）是一种广泛参与机体多种生物学功能的非编码 RNA，它主要与靶 RNA 的 3´ 端非翻译区（untranslated region，UTR）结合，导致靶 RNA 的降解或翻译终止，从而参与调控细胞发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程。而 miRNA 异常表达与多种疾病，以及肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等密切相关[3-4]。一些 miRNA 已确定在肿瘤中发挥癌基因或抑癌基因的作用，并影响肿瘤的生物学行为[5-7]。其中，miR-200 家族与肿瘤的关系是近年来的研究热点，并取得了一定进展[8]，其家族成员之一—miR-200a 与 HCC 的发生、侵袭、转移、预后等诸多方面有密切关系。笔者现就 miR-200a 在 HCC 中的研究进展进行综述。
1 miR-200a 在 HCC 中的表达情况
miR-200 家族由 miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141 及 miR-429 组成。根据不同的染色体定位，分为 2 个亚组：miR-200a、miR-200b 及 miR-429 定位于染色体 1p36.33，miR-200c 和 miR-141 定位于染色体 12p13.31。根据功能差异可分为 2 个子家族[9-10]：具有相同核心序列“AAUACU”的 miR-200b、miR-200c 及 miR-429 为 1 个子家族，具有共同核心序列“AACACU”的 miR-200a 与 miR-141 为另 1 个子家族。
miR-200a 与大多数 miR 一样，具有基因簇集现象、时序性、组织特异性、高度保守等生物学特性，在不同肿瘤细胞系及组织中，miR-200a 的表达并不完全相同。Murakami 等[11]通过微阵列方法对 24 例 HCC 组织和 22 例 HCC 癌旁组织进行研究后发现，miR-200a 在 HCC 组织中呈低表达。Feng 等[12]应用定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）和原位杂交分析方法对 115 例 HCC 组织及其癌旁组织中 miR-200a 的表达进行检测后发现，它在癌组织中的表达水平明显降低，癌旁组织的表达水平是 HCC 组织的 2.36 倍，且 miR-200a 在不同的 HCC 细胞株（HepG2、SMMC7721、BEL7402、Huh7、HCCLM3、MHCC97L 和 PLC）中的表达水平也明显低于正常肝细胞株 LO2。Wang 等[13]发现，miR-200a 在 HCC 干细胞中的表达水平低于正常肝脏干细胞。Dhayat 等[14]通过 qRT-PCR 法对 22 例 HCC 术前患者、22 例肝硬变患者及 15 例健康志愿者的血清 miR-200a 的表达水平进行检测后发现，miR-200a 在 HCC 患者血清中的表达水平显著低于肝硬变患者与健康人。
2 miR-200a 抑制 HCC 细胞增殖
近年来研究[15]表明，miR-200a 在 HCC 组织及细胞中的表达下调，正常表达或者高表达的 miR-200a 可通过影响细胞的增殖周期或信号传导通路来抑制 HCC 细胞的增殖，促进肿瘤细胞凋亡，从而发挥抑癌作用。Xiao 等[16]通过细胞增殖实验及平板克隆实验发现，转染 miR-200a 后的 HCC 细胞株（SK-HEP-1 和 Huh7）的细胞增殖速度明显低于对照组；进一步研究发现，miR-200a 通过作用于 CDK6 的 3´UTR 端，调控其介导的 Rb-E2F 传导通路，诱导肿瘤细胞停滞于 G1 期，从而发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。
有多位研究者研究了 miR-200a 抑制 HCC 细胞增殖的机制。Feng 等[12]首先证实了 miR-200a 对肝癌细胞的增殖具有抑制作用，通过 TargetScan 预测，结肠癌转移相关基因 1（metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1）可能是 miR-200a 的作用靶点，然后运用 qRT-PCR 和 Western blot 检测发现，高表达的 miR-200a 抑制 MACC1 mRNA 及其转录蛋白的表达，初步证明二者之间存在作用关联。该学者进一步进行了机制研究，荧光素酶活性实验显示：高表达的 miR-200a 作用于 MACC1 野生型 3´UTR 端，通过调控 MACC1 分子的表达而抑制细胞的增殖[12]。Chen 等[17]则从另一角度进行了研究，该研究团队使用慢病毒转染构建高表达 miR-200a 的 HCC 细胞株，通过细胞增殖实验发现，高表达组的细胞增殖率明显低于对照组（P<0.01）；进一步研究发现，miR-200a 可作用于叉头框转录因子 a2（Foxa2）的 3´UTR，miR-200a 表达的上调能抑制 Foxa2 基因 mRNA 及其转录蛋白的表达，从而抑制 HCC 细胞的增殖。
3 miR-200a 抑制 HCC 的侵袭转移
肿瘤细胞的侵袭转移是异常复杂的过程，研究[18]证实，miR-200a 能抑制 HCC 细胞的侵袭转移，其作用机制主要是通过抑制或逆转上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程来实现的。EMT 是肝细胞癌侵袭转移的关键过程之一，它的发生伴随着间质表型标志物的表达上调和上皮细胞标志物的表达下调，其中上皮细胞标志物 E-钙黏蛋白是 EMT 过程中最重要的标志物，其表达与 EMT 的发生及肿瘤侵袭转移能力呈负相关[19-21]。研究[22-23]表明，miR-200a 通过作用于锌指 E-盒结合同源异形盒（zinc finger E-boxbinding homeobox，ZEB）等靶基因 mRNA 的 3´UTR，下调其相应蛋白的表达，进而提高 E-钙黏蛋白的表达水平，抑制或逆转 EMT 过程，从而降低肿瘤细胞的侵袭和转移能力。
Hung 等[24]通过 Transwell 迁徙实验发现，高表达 miR-200a 对 HCC 细胞迁徙具有抑制作用。在 HCC 细胞株 Hep J5 与 skHep-1 中，上调 miR-200a 的表达可导致 EMT 标志蛋白——E-钙黏蛋白的表达上调，而使用 shRNA 沉默 miR-200a 基因后，E-钙黏蛋白的表达下调，提示 miR-200a 具有抑制 EMT 过程的作用。Dhayat 等[25]通过 qRT-PCR 分析发现，miR-200a 在 HCC 组织中的表达明显下调，相关性分析结果显示，miR-200a 的表达水平与间充质标志物波形蛋白和 ZEB-1 蛋白的表达水平呈负相关，与 E-钙黏蛋白的表达水平呈正相关。Zhong等[18]将 HCC 细胞株分为 miR-200a 低表达组与正常对照组，应用 qRT-PCR 和蛋白质印迹法分析对比了 2 组细胞株中 EMT 相关 mRNA 及蛋白的表达情况，结果显示，低表达组 E-钙黏蛋白 mRNA 的表达水平显著降低，相反波形蛋白及 Ki-67 蛋白的表达水平均明显升高。近年来，随着肿瘤干细胞研究的进展，也有研究[26]发现，miR-200a 可能也参与了肝癌干细胞 EMT 过程的调控。有研究[13]发现，通过转染上调肝癌干细胞中 miR-200a 的表达后，E-钙黏蛋白的表达水平显著升高，而间充质标志物 ZEB-2、N-钙黏蛋白及波形蛋白的表达水平明显降低，体外实验也证实转染后的肝癌干细胞的转移侵袭能力降低。
上述研究从不同方面证实了 miR-200a 主要通过抑制 EMT 介导的途径发挥作用，但同时还通过其他通路调控 HCC 细胞的侵袭转移。如前所述，Chen 等[17]应用 TargetScan 研究显示，Foxa2 是 miR-200a 的作用靶点，而 Foxa2 参与多种肿瘤的发生和发展[27]，miR-200a 通过作用于 Foxa2 的 3´UTR，下调其 mRNA 及蛋白的表达，使用慢病毒转染构建 miR-200a 高表达的肝细细胞株 Huh7 后，细胞迁移侵袭实验显示，高表达组的细胞侵袭能力低于对照组。另有研究者[28]运用质粒转染方法上调 miR-200a 在肝癌细胞株 MHCC97-H 和 SMMC-7721 中的表达后，细胞迁移实验结果提示，高表达的 miR-200a 对肝癌细胞的侵袭转移具有明显的抑制作用；随后进行体内实验，将 miR-200a 高表达的肝癌细胞株 SMMC-7721 注射在裸鼠皮下，发现高表达组裸鼠的肺转移率与转移结节数量均明显低于对照组（P<0.05）；再进一步运用生物信息学工具方法检测，发现接头蛋白 GAB1 可能为 miR-200a 的靶点；当使用 siRNA 敲低 GAB1 基因的内源性表达后，HCC 细胞的侵袭转移水平显著降低；荧光素酶活性实验也证实，miR-200a 正是作用于 GAB1 的 3´UTR，抑制了 GAB1 mRNA 及其蛋白的表达。该研究[28]表明，miR-200a 通过沉默 GAB1 的表达从而抑制 HCC 的侵袭转移，这是其另一条作用途径。
4 miR-200a 在 HCC 预后评估中的作用
miR-200a 在 HCC 细胞增殖和侵袭转移中具有重要作用，其表达情况是否可预测患者的预后呢？Xiao 等[16]通过对比了 56 例 miR-200a 高表达 HCC 患者与 65 例 miR-200a 低表达 HCC 患者术后的总体生存期发现，患者总体生存时间与 miR-200a 的表达水平、血清甲胎蛋白（AFP）水平、分化程度、TNM 分期及是否存在门静脉癌栓密切相关。亚组分析结果显示，miR-200a 低表达组的总体生存期较高表达组更短（P<0.01），说明低表达 miR-200a 对 HCC 的发展具有促进作用[16]。Liu 等[29]检测了 136 例行肝动脉化疗栓塞 HCC 患者术前血清中的 11 种 miRNA，发现 miR-200a、miR-21、miR-122 和 miR-224-5p 与患者术后的总体生存时间有关；多因素分析结果显示：高 AFP 水平、多卫星结节及 miR-200a 低表达是影响 HCC 介入术后患者总体生存时间的独立危险因素，且 miR-200a 表达水平对患者预后预测的准确性高于 AFP。龚哲等[30]分析了 95 例 HCC 患者血清及癌组织中 miR-200a 的表达情况，结果显示，肝癌组织中 miR-200a 的表达水平最低，癌旁组织次之，正常肝组织最高，且癌组织中 miR-200a 的表达水平与分化程度和远处转移相关；血清中 miR-200a 的表达水平与 AFP 水平、肿瘤分化程度、是否远处转移及 TNM 分期相关；高表达组和低表达组术后的 5 年累积生存率分别为 63.7% 和 41.9%，提示高表达组患者的术后生存明显好于低表达组。
在 HCC 行肝移植术的研究中，Feng 等[12]发现，miR-200a 的表达水平与预后密切相关，其中低表达组的 1、3 及 5 年复发率及存活率明显低于高表达组（总复发率：P<0.001；总生存率：P=0.037）；多因素分析发现，miR-200a 低表达是 HCC 肝移植术后患者复发的危险因素之一。
5 miR-200a 作为 HCC 血清学肿瘤标志物的潜在价值
AFP 联合影像学检查是目前应用得最广泛的 HCC 诊断方法[31]，但其存在一定的假阳性率，敏感性也有待于进一步提高[32]，探寻新的具有更好的诊断准确性及敏感性的 HCC 标志物，对提高 HCC 诊断的准确性，尤其是早期小肝癌的价值不言而喻。研究发现，某些 miRNAs 能在人类血清中稳定存在[33]，且这些 miRNAs 与肿瘤的发生发展、组织分型及分化程度密切相关，具有组织特异性，提示它们可作为诊断肿瘤的新的标志物[34-35]。
Wang 等[36]对 HCC 患者及健康志愿者血清中的 84 种 miRNA 进行检测后发现，有 18 种 miRNA 在 HCC 患者的血清中具有差异性表达，其中 miR-200a 在 HCC 患者血清中的表达降低。Dhayat 等[14]应用 qRT-PCR 法测定了 miR-200 成员在 HCC、肝硬变及健康志愿者血清中的表达，结果显示，HCC 患者血清中 miR-200a 和 miR-141 的表达水平明显低于健康对照组（P<0.007，P<0.002）；受试者工作特征（ROC）曲线提示血清中 miR-200a 和 miR-141 的差异性表达对肝癌、肝硬变患者和健康志愿者的鉴别有一定价值。汪建林等[37]通过检测 36 例 HCC 患者及 21 例健康人的血清中 miR-200a 的相对表达水平，并结合临床资料提出：miR-200a 的表达水平与患者年龄、性别、吸烟、饮酒、HBV 感染及肝硬变均无关，而与 AFP 水平、肿瘤分期及肿瘤病理分级均相关。其他学者[17]的研究也证实这一结论，并同时指出，HCC 患者血清中 miR-200a 的表达水平与肿瘤直径、TNM 分期、是否转移和复发均呈负相关，与分化程度呈正相关。通过对比 HCC 患者手术前后血清中 miR-200a 的表达水平发现，术后患者血清中 miR-200a 的表达水平较术前有明显升高[17]。以上研究结果为 miR-200a 用于 HCC 的术前诊断、术后随访、监测等提供了新的证据，但诊断可靠性仍需要更大样本量的研究进一步证实。
6 小结
miR-200 家族在肿瘤发生发展中的研究仍是目前研究领域的热点，研究[38-39]发现，miR-200a 与多种肝脏疾病的发生发展有着紧密的联系，如参与肝纤维化、肝损伤、HCC 等病理进程。它能明显抑制 HCC 细胞的增殖、侵袭和转移，发挥抑癌基因的作用。又因其在 HCC 组织、细胞及患者血清中的表达具有显著差异性，因此其可作为 HCC 诊断和预后的潜在标志物。由于 HCC 的发生和发展是多因素、多基因及多阶段的异常复杂的过程，miR-200a 仅仅是众多复杂因素之一，它与其他发生因素之间是否存在相互作用尚不清楚，仍然面临诸多疑问。相信随着 miR-200a 及其下游靶点研究的深入，miR-200a 对 HCC 发生、发展、侵袭和转移的调控机制将得到进一步阐明，可能为 HCC 诊断和靶向干预治疗提供新的途径。