目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細胞炎癥模型, 探討NF-κB p65 基因在炎癥誘導的氧化應激損傷中的作用。
方法 以腫瘤壞死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 細胞, 運用RNA 干擾技術(shù)沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法檢測沉默效率, ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清中白細胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎癥因子濃度, 比色法檢測細胞內(nèi)丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 濃度, MTT 法檢測細胞存活率。
結(jié)果 TNF-α刺激A549 細胞可在基因及蛋白水平上調(diào)NF-κB p65 的表達, 并增加NF-κB 蛋白的核轉(zhuǎn)位; 同時細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的濃度升高, 細胞內(nèi)MDA 增多, SOD 減少, 細胞存活率降低。預轉(zhuǎn)染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表達, 降低TNF-α誘導的上述各炎癥因子及MDA 濃度的增高, 減少SOD 的耗損, A549 細胞存活率升高( P lt;0.05) 。
結(jié)論 NF-κB 能介導TNF-α觸發(fā)的過度炎癥反應和氧化應激, 導致細胞存活率明顯降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下調(diào)炎癥反應水平及其誘發(fā)的氧化應激, 減輕肺結(jié)構(gòu)細胞的損傷。
引用本文： 吳煒景 ,李理,袁偉鋒,李偉峰,黃文杰. NF-κB p65 基因在TNF-α誘導的肺泡上皮細胞氧化損傷中的作用. 中國呼吸與危重監(jiān)護雜志, 2012, 11(1): 46-51. doi: 復制