目的克隆人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(hVEGF)基因VEGF165片段,構(gòu)建pcDNA3.1/hVEGF165, 觀察其在COS-7細(xì)胞中的表達(dá),為基因治療缺血性心臟病的研究奠定基礎(chǔ)。方法從合法引產(chǎn)的胎兒心肌組織中提取總核糖核酸(RNA),應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法獲得hVEGF165基因,將其重組入T載體,聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法鑒定并測(cè)序,雙酶切后克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-his-B中,構(gòu)建pcDNA3.1/hVEGF165重組體。用脂質(zhì)體介導(dǎo)將其轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,蛋白印跡(Westernblotting)法檢測(cè)rhVEGF165的表達(dá)蛋白。結(jié)果用RT-PCR方法從胎兒心肌組織中獲得了正確的hVEGF165基因序列,并成功構(gòu)建pcDNA3.1/hVEGF165,且實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)。結(jié)論構(gòu)建的pcDNA3.1/hVEGF165轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞COS-7能夠表達(dá)rhVEGF蛋白。
引用本文： 葛建軍,周正春,陳兵,等. hVEGF165基因克隆及其在COS-7細(xì)胞中的表達(dá). 中國(guó)胸心血管外科臨床雜志, 2005, 12(3): 185-188. doi: 復(fù)制