目的 構(gòu)建重組人BMP-2(recombinant human BMP-2,rhBMP-2)修飾的β 磷酸三鈣(β tricalcium phosphate,β-TCP)/ 膠原生物支架材料,初步探討其在牙組織工程中發(fā)揮的作用,評價(jià)其作為牙組織工程支架材料的可行性。 方法 將納米級β-TCP 粉末與膠原在強(qiáng)堿性水溶液中復(fù)合,制備β-TCP/ 膠原生物支架材料,并與rhBMP-2 復(fù)合,制備牙組織工程支架材料。SPF 級8 ~ 10 周齡SD 大鼠46 只,雄性34 只,雌性12 只,體重250 ~ 300 g。體視顯微鏡下分離新生SD 大鼠的下頜骨,取牙胚消化成細(xì)胞懸液,與支架材料復(fù)合培養(yǎng)制備組織工程牙胚。通過掃描電鏡觀察、細(xì)胞
黏附率測定和MTT 測定細(xì)胞增殖情況評價(jià)支架材料對牙胚細(xì)胞體外生長的影響。將組織工程牙胚植入SD 大鼠腎被膜下作為實(shí)驗(yàn)組(n=12),另分別植入單獨(dú)牙胚細(xì)胞團(tuán)塊(細(xì)胞對照組,n=12)及單獨(dú)支架材料(材料對照組,n=4)作為對照,4、8 周時(shí)取出標(biāo)本行大體及組織學(xué)觀察。 結(jié)果 掃描電鏡示β-TCP/ 膠原生物支架材料呈疏松多孔狀,質(zhì)地柔軟,親水性良好;復(fù)合培養(yǎng)3 d 后牙胚細(xì)胞可緊密貼附于支架材料,生長狀態(tài)良好。牙胚細(xì)胞接種至支架材料上經(jīng)4、8、12 h 孵育后,細(xì)胞黏附率分別為27.20% ± 2.37%、44.52% ± 1.87%、73.81% ± 4.15%。MTT 檢測示牙胚細(xì)胞在β-TCP/ 膠原生物支架材料上的增殖情況與未放置支架材料相似,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。各組植入物移植于大鼠腎被膜下4、8 周后大體觀察可見白色鈣化物形成;植入后4 周,實(shí)驗(yàn)組鏡下可見明顯牙樣形態(tài)及典型的釉質(zhì)和牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)形成,細(xì)胞對照組可見釉質(zhì)和牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu),但排列相對紊亂;植入后8 周,實(shí)驗(yàn)組釉質(zhì)及牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)較4 周成熟,層次也更加清晰,細(xì)胞對照組也可見較為成熟的釉質(zhì)和牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu);植入后4、8 周,材料對照組均未見牙樣結(jié)構(gòu)形成。 結(jié) 論 rh BMP-2 修飾的β-TCP/ 膠原生物支架材料與牙胚細(xì)胞生物相容性良好,可作為牙組織工程支架材料的良好選擇。
引用本文: 張文濤,劉建華,王慧明,李志勇. 重組人BMP-2 修飾的β 磷酸三鈣/ 膠原材料制備及其誘導(dǎo)成牙性能的初步研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2011, 25(2): 149-154. doi: 復(fù)制