目的 胰島的純度和活性對(duì)胰島移植治療糖尿病的療效有很大影響。探討一種大鼠胰島分離純化的新方法，以獲得高純度、高產(chǎn)量、活性好的胰島。 方法 選取健康成年雄性SD 大鼠10 只，體重250 ～ 300 g，逆行膽總管灌注Ⅴ型膠原酶溶液，38℃水浴消化約15 min 后，采用兩種方法純化胰島細(xì)胞：A 組采用Ficoll 400 不連續(xù)密度梯度液，B 組采用Ficoll-Paque? PLUS 溶液。行雙硫腙（dithizone，DTZ）染色鑒定胰島并計(jì)算胰島當(dāng)量（islet equivalent quantity，IEQ）、胰島純度，錐蟲(chóng)藍(lán)染色檢測(cè)胰島活性。取B 組胰島用海藻酸鈉- 聚左賴(lài)氨酸- 海藻酸鈉（alginate/poly-Llysine/ alginate，APA）包裹制備胰島微囊，體外靜止葡萄糖刺激胰島素釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)微囊化和未微囊化胰島的生物學(xué)活性。 結(jié)果 DTZ 染色示胰島呈猩紅色，有圓形、橢圓形和不規(guī)則形，胰島邊緣清晰，大部分直徑為50 ～ 300 μm。A、B組IEQ 值分別為338.04 ± 76.61 和834.80 ± 54.00，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A、B 組胰島純度分別為88.31% ± 2.67% 和95.63% ± 1.96%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。A、B 組胰島活率分別為67.40% ± 5.15% 和86.05% ± 2.52%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。胰島APA 微囊囊形呈完整圓形，大小均勻，微囊直徑為1.5 ～ 2.0 mm，每個(gè)微囊中包裹1 ～ 3 個(gè)胰島。葡萄糖刺激釋放胰島素實(shí)驗(yàn)顯示，未微囊化胰島和微囊化胰島在低糖下的胰島素分泌濃度分別為（5.53 ±1.64） ng/ mL 和（4.76 ± 0.26）ng/mL，高糖下分別為（11.95 ± 2.07）ng/mL 和（14.34 ± 3.18）ng/mL，高糖刺激下胰島素釋放量為低糖刺激的2 倍多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；兩組的刺激指數(shù)分別為2.16 ± 0.30 和3.01 ± 0.59，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Ficoll-Paque? PLUS 溶液作為純化液分離純化胰島的方法具有操作簡(jiǎn)便、胰島產(chǎn)量高、純度高等優(yōu)點(diǎn)，獲得的胰島經(jīng)微囊化或未微囊化體外培養(yǎng)均有良好活性。
引用本文： 徐艷艷,傅紅興,王浙明,周賢用,許宇璐,汪大望,薛圣留,李校堃. 大鼠胰島分離純化技術(shù)的改良及活性研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(4): 406-409. doi: 復(fù)制