目的 采用單層分步法誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞（human embryonic stem cells，hESCs）分化為肝樣細(xì)胞，建立hESCs 分化為肝細(xì)胞的誘導(dǎo)體系。 方法 將hESC 株H1 細(xì)胞接種到Matrigel 包被的培養(yǎng)板上，早期（細(xì)胞貼壁4 d 后）加入含有細(xì)胞因子活化素A（Activin A）的分化液誘導(dǎo)5 d；中期將誘導(dǎo)液換為含F(xiàn)GF-1 和BMP-4 的肝分化液誘導(dǎo)6 d；最后添加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）和制癌蛋白M（Oncostatin M，OSM）繼續(xù)誘導(dǎo)分化5 ～ 7 d。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、RT-PCR、過(guò)碘酸- 雪夫（Periodicacid-Schiff，PAS）反應(yīng)鑒定分化細(xì)胞的性質(zhì)。 結(jié)果 經(jīng)ActivinA、FGF-1、BMP-4、HGF 和OSM 連續(xù)誘導(dǎo)的hESCs 呈多角形、卵圓形或圓形，排列緊密；部分細(xì)胞出現(xiàn)二核或三核，呈現(xiàn)肝細(xì)胞所特有的形態(tài)。分化細(xì)胞在誘導(dǎo)早期表達(dá)SOX17、叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）A2、GATA-4，中期表達(dá)甲胎蛋白（αfetoprotein，AFP）、白蛋白、角蛋白18，晚期表達(dá)成熟肝細(xì)胞特異性基因乙醇脫氫酶1C、細(xì)胞色素P4501B1。免疫細(xì)胞化學(xué)染色示，Activin A 誘導(dǎo)后，細(xì)胞呈SOX17 和FOXA2 陽(yáng)性；經(jīng)FGF-1 和BMP-4 誘導(dǎo)后，呈AFP 和α1 抗胰蛋白酶陽(yáng)性。HGF 和OSM 誘導(dǎo)后，PAS 糖原染色檢測(cè)陽(yáng)性。 結(jié)論 采用單層分步法逐步添加細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)hESCs 分化為肝樣細(xì)胞。該分化體系可為肝細(xì)胞移植、肝組織工程等臨床治療提供一個(gè)有效的細(xì)胞來(lái)源。
引用本文： 胡智興,羅敏,梁道明. 單層分步法誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞定向肝樣細(xì)胞分化. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(7): 838-842. doi: 復(fù)制