目的 探討hVEGF165 及hBMP-7 共表達重組腺相關(guān)病毒載體（recombinant adeno-associated virus，rAAV）介導(dǎo)基因表達的時效性，為體內(nèi)應(yīng)用其進行骨壞死的基因治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法 應(yīng)用熒光細胞計數(shù)法測定rAAV 轉(zhuǎn)染兔BMSCs 的最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)。分別采用rAAV-hVEGF165- 內(nèi)部核糖體進入位點序列（internal ribosome entry site，IRES）- hBMP-7（實驗組）、綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記平行對照rAAV-IRES-GFP（對照組）在最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)條件下轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第3 代兔BMSCs。于不同時間點分別行GFP 表達檢測、RT-PCR 檢測、Western blot 檢測明確rAAV 體外介導(dǎo)基因表達的時效性關(guān)系。將實驗組及對照組病毒轉(zhuǎn)染后的BMSCs 以5 × 106 個/ mL 密度，分別注射至9 只2 月齡純種雄性新西蘭大耳白兔制備的肌袋模型內(nèi)各1 mL（實驗組1 及對照組1），于不同時間點分別行GFP表達檢測、Western blot 檢測及ELISA 檢測明確rAAV 體內(nèi)介導(dǎo)基因表達的時效性關(guān)系。 結(jié) 果 rAAV 轉(zhuǎn)染兔BMSCs的最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)為5 × 104 v.g/cell。通過體外檢測顯示rAAV 轉(zhuǎn)染BMSCs 后1 d 即有目的基因表達，14 d 時表達強度明顯增強，至28 d 時仍維持較強表達。通過體內(nèi)檢測顯示體內(nèi)轉(zhuǎn)染2 周可檢測到目的基因表達，6 周時表達強 度增強，8 周時仍維持較高水平。ELISA 法檢測實驗組1 細胞培養(yǎng)上清中hVEGF165 和hBMP-7 含量分別為（248.67 ± 75.58）pg/mL 和（4.80 ± 0.61） ng/ mL， 對照組1 分別為（32.28 ± 8.42）pg/mL 和（0.64 ± 0.42）ng/mL，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 雙基因共表達rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7 具有較好的轉(zhuǎn)染時效性。
引用本文： 張晨,強輝,黨曉謙,王坤正. hVEGF165 及hBMP-7 共表達重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)基因表達的時效性研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(9): 1121-1127. doi: 復(fù)制
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