目的 探討hVEGF165 及hBMP-7 共表達(dá)重組腺相關(guān)病毒載體（recombinant adeno-associated virus，rAAV）介導(dǎo)基因表達(dá)的時(shí)效性，為體內(nèi)應(yīng)用其進(jìn)行骨壞死的基因治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法 應(yīng)用熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定rAAV 轉(zhuǎn)染兔BMSCs 的最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)。分別采用rAAV-hVEGF165- 內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列（internal ribosome entry site，IRES）- hBMP-7（實(shí)驗(yàn)組）、綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標(biāo)記平行對(duì)照rAAV-IRES-GFP（對(duì)照組）在最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)條件下轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第3 代兔BMSCs。于不同時(shí)間點(diǎn)分別行GFP 表達(dá)檢測(cè)、RT-PCR 檢測(cè)、Western blot 檢測(cè)明確rAAV 體外介導(dǎo)基因表達(dá)的時(shí)效性關(guān)系。將實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組病毒轉(zhuǎn)染后的BMSCs 以5 × 106 個(gè)/ mL 密度，分別注射至9 只2 月齡純種雄性新西蘭大耳白兔制備的肌袋模型內(nèi)各1 mL（實(shí)驗(yàn)組1 及對(duì)照組1），于不同時(shí)間點(diǎn)分別行GFP表達(dá)檢測(cè)、Western blot 檢測(cè)及ELISA 檢測(cè)明確rAAV 體內(nèi)介導(dǎo)基因表達(dá)的時(shí)效性關(guān)系。 結(jié) 果 rAAV 轉(zhuǎn)染兔BMSCs的最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)為5 × 104 v.g/cell。通過體外檢測(cè)顯示rAAV 轉(zhuǎn)染BMSCs 后1 d 即有目的基因表達(dá)，14 d 時(shí)表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，至28 d 時(shí)仍維持較強(qiáng)表達(dá)。通過體內(nèi)檢測(cè)顯示體內(nèi)轉(zhuǎn)染2 周可檢測(cè)到目的基因表達(dá)，6 周時(shí)表達(dá)強(qiáng) 度增強(qiáng)，8 周時(shí)仍維持較高水平。ELISA 法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組1 細(xì)胞培養(yǎng)上清中hVEGF165 和hBMP-7 含量分別為（248.67 ± 75.58）pg/mL 和（4.80 ± 0.61） ng/ mL， 對(duì)照組1 分別為（32.28 ± 8.42）pg/mL 和（0.64 ± 0.42）ng/mL，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 雙基因共表達(dá)rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7 具有較好的轉(zhuǎn)染時(shí)效性。
引用本文： 張晨,強(qiáng)輝,黨曉謙,王坤正. hVEGF165 及hBMP-7 共表達(dá)重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)基因表達(dá)的時(shí)效性研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2010, 24(9): 1121-1127. doi: 復(fù)制