目的 對(duì)乳豬竇房結(jié)所在部位進(jìn)行準(zhǔn)確定位，建立一套可靠的竇房結(jié)細(xì)胞取材、分離、純化培養(yǎng)技術(shù)；觀察竇房結(jié)細(xì)胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內(nèi)新生純種長(zhǎng)白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用多導(dǎo)電生理記錄儀標(biāo)記房波最早出現(xiàn)的部位，在該位置取材行原代竇房結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)，分別采用常規(guī)方法培養(yǎng)和差速貼壁分離技術(shù)、5-BrdU 處理純化培養(yǎng)；于左心房部位取材行心房肌細(xì)胞純化培養(yǎng)作為對(duì)照。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞貼壁時(shí)間、單細(xì)胞出現(xiàn)搏動(dòng)時(shí)間、搏動(dòng)頻率等。將純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞以5 × 105 個(gè)/mL 密度接種至經(jīng)預(yù)濕處理的Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結(jié)果 房波最早出現(xiàn)的位置即為竇房結(jié)所在部位。純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞有3 種形態(tài)，即梭形、三角形與不規(guī)則形，其中梭形細(xì)胞最多；心房肌細(xì)胞主要為三角形及不規(guī)則形，而無(wú)梭形細(xì)胞。竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)與常規(guī)培養(yǎng)比較，梭形細(xì)胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；不規(guī)則形細(xì)胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；三角形細(xì)胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。竇房結(jié)細(xì)胞復(fù)合Col Ⅰ纖維支架培養(yǎng)5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細(xì)胞；掃描電鏡見細(xì)胞成團(tuán)吸附于支架表面及孔隙側(cè)壁，并可見細(xì)胞間通過(guò)突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結(jié)論 通過(guò)準(zhǔn)確竇房結(jié)定位，采用差速貼壁結(jié)合5-BrdU 處理的純化培養(yǎng)可明顯提高乳豬竇房結(jié)梭形細(xì)胞比例，是一種可靠的竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)技術(shù)。竇房結(jié)細(xì)胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細(xì)胞相容性。
引用本文： 萬(wàn)居易,鐘曉琳,廖斌,王明勇,鄧明彬. 乳豬竇房結(jié)細(xì)胞原代培養(yǎng)及與Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 980-984. doi: 復(fù)制