【摘 要】 目的 通過采用BrdU 標記連續(xù)培養(yǎng)的家兔脂肪組織來源干細胞（adipose-derived stromal stem cells，
ADSCs），檢測其最佳標記時間、標記劑量及毒性作用，探討其作為干細胞標記示蹤方法的可行性。 方法 8 ～ 12 周齡
健康新西蘭大白兔6 只，雌雄不限，體重1.5 ～ 2.0 kg。切取腹股溝皮下1 ～ 2 mL 脂肪組織，采用貼壁法體外分離培養(yǎng)
ADSCs，并進行鑒定。取第3 代細胞以終濃度分別為5、10、15 和20 μg/mL 的BrdU 進行標記，分別記為A、B、C 及D 組；另1 孔不含BrdU，作為空白對照（E 組）。標記12、24、48 和72 h 后，采用免疫組織化學檢測各組細胞陽性率，苔盼藍排染法行細胞計數(shù)觀察標記后細胞活性。 結果 原代培養(yǎng)的ADSCs 形態(tài)主要為寬大、扁平、短梭形細胞；傳代后細胞形態(tài)主要為長梭形；第3 代ADSCs 經誘導均能向成骨細胞和脂肪細胞分化。免疫組織化學觀察：第3 代ADSCs 經BrdU 標
記后，在熒光顯微鏡下胞核呈綠色熒光。孵育12 h，A、B、C、D 組細胞標記陽性率逐漸增高，分別為30.6%±2.3%、32.4%±1.9%、45.8%±1.8%、50.8%±3.1%，C、D 組與A 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；24 h，A、B、C 及D 組標記率分別為45.9%±2.0%、87.9%±3.3%、90.6%±2.9% 及91.7%±3.2% ；48 h 和72 h，A、B、C、D 組標記情況與24 h 相似；E 組各時間點細胞標記陽性率為0。孵育24、48 及72 h，B、C 及D 組細胞陽性率與A 組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。孵育12、24 、48 及72 h 細胞計數(shù)，各組細胞活性均在90% 以上，A、B、C、D 組與E 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 BrdU 標記ADSCs 的最佳時間為48 h，最佳濃度為10 μg/mL；BrdU 對細胞標記率及安全性高。
引用本文： 黎洪棉,高建華,魯峰,李華. BrdU 標記家兔脂肪組織來源干細胞的體外研究. 中國修復重建外科雜志, 2008, 22(1): 97-101. doi: 復制
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