目的 探討構(gòu)建人骨形成蛋白2（human bone morphgenetic protein 2，hBMP-2）真核表達(dá)載體的方法。 方法 由人成骨肉瘤細(xì)胞中提取細(xì)胞總RNA，利用RT-PCR方法擴(kuò)增獲得hBMP-2基因cDNA，將基因片斷重組到pGEM-T質(zhì)粒中構(gòu)建pGEMT- hBMP-2重組質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α后篩選陽(yáng)性克隆，利用限制性酶切和DNA序列分析鑒定重組質(zhì)粒。分別用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切pGEM-T- hBMP-2 質(zhì)粒和pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體，將克隆載體中hBMP基因重組到pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體 ，提取質(zhì)粒作酶切電泳、PCR鑒定及DNA測(cè)序。 結(jié)果 人骨肉瘤細(xì)胞中經(jīng)RT-PCR得到1.2 kbp的hBMP-2擴(kuò)增條帶，重組質(zhì)粒pGEM-T-hBMP-2經(jīng)酶切電泳可見(jiàn)1.2 kbp的hBMP-2條帶和4.0 kbp的載體片斷；pcDNA3.1-hBMP-2 質(zhì)粒經(jīng)酶切電泳可見(jiàn)1.2 kbp的hBMP2條帶和5.0 kbp的載體片斷，重組質(zhì)粒酶譜分析與預(yù)期一致；DNA序列分析測(cè)序結(jié)果校對(duì)后經(jīng)BLAST分析，表明核酸序列與Gene Bank中和hBMP-2 的mRNA序列完全吻合。 結(jié)論 通過(guò)此方法能成功克隆獲得hBMP-2基因，并構(gòu)建其真核表達(dá)載體。
引用本文： 田曉濱,孫立,楊述華. 克隆并構(gòu)建人骨形成蛋白2真核表達(dá)載體. 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(2): 112-115. doi: 復(fù)制