目的 利用抑制消減雜交（suppression subtractive hybridization，SSH）技術(shù)，比較瘢痕疙瘩與正常皮膚組織之間基因表達差異，篩選瘢痕疙瘩特有的差異表達基因片段，為揭示瘢痕疙瘩的病因提供實驗依據(jù)。方法 提取瘢痕疙瘩與正常皮膚組織細胞mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以瘢痕疙瘩cDNA為檢測子，正常皮膚組織細胞cDNA為驅(qū)動子，選擇四堿基內(nèi)切酶RsaⅠ將cDNA酶切；連接特殊設(shè)計的接頭進行消減雜交和PCR反應(yīng)，得到消減混合物，與T載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細菌，建立差異消減文庫。Southern雜交篩選鑒定差異基因，進行測序和同源分析。結(jié)果 經(jīng)SSH篩選、Southern雜交鑒定得到13個瘢痕疙瘩差異表達基因，其中已知功能的基因11個，如TA結(jié)合因子1、E4基因轉(zhuǎn)錄因子1、ephrin B2型受體基因、血小板生長因子受體基因等；有與腫瘤發(fā)生有關(guān)的基因，如G抗原7基因等；未知功能基因2個。結(jié)論 篩選得到的瘢痕疙瘩差異表達基因，對了解瘢痕疙瘩發(fā)生發(fā)展的病因?qū)W基礎(chǔ)和指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。
引用本文： 羅勇,高建華,趙菲,張寶. 利用抑制消減雜交篩選瘢痕疙瘩差異表達基因. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2006, 20(5): 495-498. doi: 復(fù)制