目的 構(gòu)建人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表達(dá)質(zhì)粒，研究其在體內(nèi)外的表達(dá)。方法 通過(guò)基因克隆技術(shù)，構(gòu)建并大量制備pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表達(dá)體系，RT-PCR和細(xì)胞免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)體外瞬時(shí)表達(dá)情況；直流電脈沖介導(dǎo)重組質(zhì)粒pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子121(vascular endothelial growth factor, VEGF121)在兔頸部肌肉瓣內(nèi)轉(zhuǎn)移并表達(dá)，測(cè)定其促血管生成的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果 構(gòu)建的pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表達(dá)體系成功轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，目的基因在mRNA水平和蛋白水平均有表達(dá)。pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-VEGF121重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染在體肌瓣，獲得外源基因高水平表達(dá)。轉(zhuǎn)基因肌肉發(fā)生血管增生、血流增強(qiáng)的生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)論 構(gòu)建了人bFGF真核表達(dá)質(zhì)粒，并可在體內(nèi)外順利表達(dá)，為進(jìn)一步組織移植或組織工程基因治療研究奠定了基礎(chǔ)。
引用本文： 張啟旭,周剛,陸佳韻,劉芝華. 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá). 中國(guó)修復(fù)重建外科雜志, 2004, 18(5): 435-439. doi: 復(fù)制