目的 比較體外不同培養(yǎng)條件對(duì)視網(wǎng)膜及腦神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)視紫紅質(zhì)的純化能力及不同誘導(dǎo)條件對(duì)NSCs的誘導(dǎo)分化能力。方法 取胚兔視網(wǎng)膜及大腦皮質(zhì)制備單細(xì)胞懸液,分別在5種不同培養(yǎng)基中進(jìn)行體外培養(yǎng)并純化。選取無(wú)血清條件下傳3代的NSCs,分別在2種培養(yǎng)基中誘導(dǎo)8~10 d。采用免疫熒光法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)所獲得細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮細(xì)胞抗原的表達(dá)。結(jié)果 免疫熒光法顯示無(wú)血清培養(yǎng)條件下2種組織來(lái)源的NSCs均部分表達(dá)巢蛋白。流式細(xì)胞術(shù)顯示2種誘導(dǎo)方式均部分細(xì)胞表達(dá)巢蛋白,較誘導(dǎo)前明顯降低,而視紫紅質(zhì)及Thy1.1的表達(dá)均較誘導(dǎo)前明顯增高。經(jīng)5%胎牛血清(FBS)誘導(dǎo)的細(xì)胞表達(dá)視紫紅質(zhì)較聯(lián)合應(yīng)用全反式視黃酸(ATRA)時(shí)高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( chi;2=30.59,6.76;P<0.01),但Thy1.1表達(dá)低于后者,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( chi;2=6.19,22.92;P=0.01)。結(jié)論 無(wú)血清培養(yǎng)基添加N2、EGF、bFGF、LIF 4種因子可以獲得最佳純化效果。2種誘導(dǎo)培養(yǎng)基都能夠誘導(dǎo)NSCs的分化,視網(wǎng)膜NSCs分化為視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮細(xì)胞的能力高于大腦皮質(zhì)NSCs。
引用本文: 吳嬋,董方田,陳連鳳,許卓再. 體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)胚兔視網(wǎng)膜及腦神經(jīng)干細(xì)胞分化的研究. 中華眼底病雜志, 2009, 25(4): 265-269. doi: 復(fù)制