• 510060 廣州,中山大學(xué)中山眼科中心,眼科學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;

目的 分離及純化人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞OCM-1中的腫瘤干細(xì)胞。 方法 將OCM-1細(xì)胞復(fù)蘇,使用Dubecco標(biāo)準(zhǔn)改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM/F12)培養(yǎng)后,改用無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基(SFM),并分離純化培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)記物CD133的表達(dá)比率,并對(duì)第六代細(xì)胞進(jìn)行神經(jīng)RNA結(jié)合蛋白(musashi-1)免疫細(xì)胞化學(xué)染色,顯微鏡下觀(guān)察陽(yáng)性細(xì)胞比率。 結(jié)果 在標(biāo)準(zhǔn)DMEM/F12培養(yǎng)基中貼壁生長(zhǎng)的OCM1細(xì)胞用SFM培養(yǎng)基培養(yǎng)后,貼壁細(xì)胞顯著減少,至第6代時(shí)細(xì)胞均為懸浮團(tuán)狀集落生長(zhǎng),呈現(xiàn)典型的干細(xì)胞生長(zhǎng)方式。在不同代的細(xì)胞中,CD133均有陽(yáng)性,未經(jīng)過(guò)分離的OCM-1細(xì)胞、經(jīng)過(guò)SFM培養(yǎng)并分離的第1、2代OCM1細(xì)胞的陽(yáng)性比率分別2.5%、217%、57.8%,第6代的細(xì)胞CD133陽(yáng)性比率達(dá)到79.8%,musashi-1強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。 結(jié)論 脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞中存在腫瘤干細(xì)胞。使用干細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng),并通過(guò)限制分化、連續(xù)傳代的方法,可分離純化出懸浮克隆集落生長(zhǎng)的干細(xì)胞。 (中華眼底病雜志,2007, 23:87-90)

引用本文: 劉斌,李永平,彭展. 人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤OCM-1細(xì)胞中腫瘤干細(xì)胞的分離純化. 中華眼底病雜志, 2007, 23(2): 87-90. doi: 復(fù)制

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