• 1.福建醫(yī)科大學?？偱R床醫(yī)學院（福州 350025）;;
  • 2.南京軍區(qū)福州總醫(yī)院普通外科研究所（福州 350025）;

目的  根據(jù)基因庫中的人肝素酶（HPSE）基因序列，構(gòu)建針對肝素酶基因的小干擾RNA（siRNA）及其表達載體，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞后觀察其對肝素酶基因的干擾作用。
方法  設計肝素酶靶向的發(fā)夾狀siRNA，合成2條互補的寡核苷酸鏈共4對，退火后連接入pGPU6/GFP/Neo載體，轉(zhuǎn)化后進行序列鑒定，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，熒光照片，RT-PCR （real-time PCR）檢測肝素酶mRNA的表達情況。 結(jié)果  設計出4條針對肝素酶的siRNA，將退火后的雙鏈寡核苷酸片段克隆到pGPU6/GFP/Neo載體，經(jīng)過陽性菌落酶切鑒定與測序，結(jié)果正確。再將siRNA載體轉(zhuǎn)染到MDA-MB-231細胞株，RT-PCR檢測肝素酶mRNA表達明顯降低（P lt;0.05）。
結(jié)論  成功構(gòu)建了針對肝素酶基因的siRNA載體，轉(zhuǎn)染到MDA-MB-231細胞株后細胞肝素酶基因的表達明顯降低，從而為腫瘤治療提供了一種新的方法。

引用本文： 劉啟志,王烈. siRNA表達載體對肝素酶基因的沉默作用. 中國普外基礎與臨床雜志, 2010, 17(2): 142-146. doi: 復制

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