為減損排斥反應性淋巴細胞克隆，采用異型雙功能試劑SPDP、2-IT連接antiCD4、CD8單克隆抗體與天花粉毒素(TCS)，應用Sephacryl S-200分離游離TCS，采用SDS-PAGE電泳及細胞毒性分析測定合成的免疫毒素的純度和生物學活性。電泳結(jié)果顯示，連接混合物中含有連接的免疫毒素、游離的單克隆抗體和TCS，Sephacryl S-200可除去游離的TCS。體外，免疫毒素可特異性殺傷大鼠脾細胞，其作用具有劑量依賴性。由此提示抗CD4、CD8免疫毒素可以誘導免疫無反應性。
目的 構(gòu)建白細胞介素18(interleukin18，IL-18)-PE38融合基因的真核表達載體，并研究其在小鼠軟骨細胞及3T3細胞中的表達,探討類風濕性關節(jié)炎的基因治療方法。方法 經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切從質(zhì)粒PRKL459K-IL18-PE38中獲取IL-18-PE38融合基因, 將其與真核表達載體PsecTag2B連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌，挑取單克隆培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，EcoRⅠ單酶切鑒定。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建的真核表達載體轉(zhuǎn)染入3T3細胞及小鼠軟骨細胞中，分別設置空載體對照，通過熒光免疫細胞化學法鑒定轉(zhuǎn)染后瞬時表達情況。結(jié)果 EcoRⅠ單酶切后電泳鑒定顯示，所構(gòu)建的真核表達載體PsecTag2B-IL-18-PE38片段長度約為6 000bp。熒光免疫細胞化學法、熒光顯微鏡攝片均顯示轉(zhuǎn)染融合基因組熒光表達強，空載體對照組熒光表達微弱。結(jié)論 IL-18-PE38融合基因真核表達載體構(gòu)建成功，并在小鼠軟骨細胞及3T3細胞中表達，為類風濕性關節(jié)炎的基因治療研究奠定基礎。