目的 觀察鹽酸氨溴索對油酸誘導的ALI 兔肺組織細胞凋亡的影響, 探討鹽酸氨溴索對ALI 的作用及其機制。方法 健康日本大耳白兔24 只, 隨機分為3 組: 正常對照組( NC 組) 、ALI組和鹽酸氨溴索治療組( AMB 組) 。復制兔油酸型ALI 模型。光鏡觀察各組干預后6 h肺組織病理改變, 肺組織細胞凋亡指數(shù)( AI) 以及肺組織勻漿Caspase-3 活性, 檢測各組干預前及干預后6 h血清超氧化物歧化酶( SOD) 活性和丙二醛( MDA) 、IL-1β及TNF-α含量。結(jié)果 AMB 組肺組織病理損傷較ALI 組明顯減輕, AI 顯著低于ALI 組( P lt;0. 01) , 但顯著高于NC 組( P lt; 0. 01) ; AMB 組肺組織勻漿Caspase-3 活性顯著低于ALI 組( P lt; 0. 05) ; AMB組干預后6 h血清SOD 活性顯著高于ALI 組, 而血清MDA、IL-1β及TNF-α含量顯著低于ALI 組( P lt;0. 01) 。結(jié)論 鹽酸氨溴索有一定的抗ALI 的作用, 其機制可能與抑制氧化應激, 從而抑制細胞因子合成、減少Caspase-3 的活化、抑制肺組織細胞凋亡有關(guān)。
目的 觀察姜黃素誘導特發(fā)性肺纖維化( IPF) 患者肺成纖維細胞凋亡的作用, 探討相關(guān)分子機制。方法 體外培養(yǎng)開胸肺活檢IPF 患者的肺成纖維細胞。采用不同濃度姜黃素( 5、10、20及40 μmol /L) 作用于肺成纖維細胞。MTT 法檢測姜黃素對肺成纖維細胞增殖的抑制作用, 計算細胞抑制率; 應用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡以及凋亡相關(guān)基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( Caspase-3) 的表達。采用SPSS11. 5 軟件進行統(tǒng)計學分析, 多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析, 采用Pearson 相關(guān)分析進行相關(guān)性檢驗。結(jié)果 5 ～40 μmol / L 姜黃素作用于肺成纖維細胞不同時間( 6、12、24 及48 h)后, 對細胞增殖具有明顯抑制作用, 呈劑量-時間效應關(guān)系, 抑制率與濃度和時間均呈正相關(guān)( r =0. 886, r =0. 832, P 均lt; 0. 01) 。流式細胞術(shù)檢測到細胞凋亡, 5 ～40 μmol /L 姜黃素作用后凋亡率分別為( 29. 58 ±2. 13) % 、( 64. 36 ±3. 92) %、( 72. 98 ±4. 42) % 和( 83. 14 ±2. 51) % , 與不加姜黃素的陰性對照組( 3. 84 ±1. 88) % 比較, 差異均有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 01) ; Caspase-3 蛋白表達陽性率分別為( 26. 24 ±3. 64) % 、( 44. 87 ±5. 31) % 、( 57. 44 ±4. 23) % 和( 73. 65 ±5. 01) % , 與不加姜黃素的陰性對照組( 4. 02 ±0. 62) %比較, 差異均有統(tǒng)計學意義( P lt;0. 01) 。結(jié)論 姜黃素可能通過激活Caspase-3,誘導IPF 患者肺成纖維細胞凋亡。
目的 探討Livin 在非小細胞肺癌( NSCLC) 中的表達, 及與NSCLC 病理、生物學行為指標和預后的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學法檢測87 例NSCLC 腫瘤組織和40 例肺良性組織中 Livin、Caspase-3 和Bcl-2 蛋白的表達情況, 將其表達與NSCLC 病理、生物學行為等指標進行相關(guān)分析。多因素COX 回歸生存分析探討Livin、Caspase-3 和Bcl-2 蛋白表達水平與預后的關(guān)系。結(jié)果 Livin 和Bcl-2 蛋白在肺癌組織中的表達明顯高于在肺良性病變組織中的表達( 72. 41% 比0. 0% ,74. 71% 比0. 0%, P = 0. 000) , Caspase-3 蛋白表達則明顯降低( 67. 82% 比87. 5% , P lt; 0. 05) 。Livin、Caspase-3 和Bcl-2 表達主要位于胞漿, 未見核內(nèi)表達。其表達與肺癌的組織細胞類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小以及部位無明顯相關(guān)性。在NSCLC 中, Livin 蛋白表達與Caspase-3 和Bcl-2 蛋白表達有相關(guān)性( r1 = - 0. 260, P = 0. 015; r2 =0. 351, P =0. 001) 。Livin、Caspase-3 和Bcl-2 不是影響肺癌手術(shù)患者預后的獨立預后因素。結(jié)論 Livin 蛋白、Bcl-2 蛋白在肺癌組織中表達上調(diào),Livin 的表達與Caspase-3、Bcl-2 蛋白的表達呈相關(guān)性, 三者在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起協(xié)同作用。Livin、Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表達與患者的預后無明顯關(guān)系。
目的 觀察褪黑素對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷（RIRI）大鼠視網(wǎng)膜細胞凋亡的影響，并探討其可能機制。 方法 健康無眼疾雄性Sprague-Dawley成年大鼠54只，采用隨機數(shù)字表法隨機分為正常對照組、RIRI組及褪黑素組，分別為6、24、24只。RIRI組及褪黑素組大鼠采用線栓法建立RIRI模型。褪黑素組大鼠按1.25 ml/kg劑量注射4 mg/ml褪黑素，RIRI組大鼠注射等量生理鹽水。正常對照組大鼠不作干預。建模后6、24 h及3、7 d，RIRI組及褪黑素組分別取6只大鼠用于實驗。制作視網(wǎng)膜切片，蘇木精伊紅（HE）染色觀察各組大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)變化；免疫組織化學染色計數(shù)活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2 相關(guān)因子2（Nrf2）、血紅素氧合酶（HO）-1 陽性細胞數(shù)量。采用一般線性回歸分析法分析建模后不同時間點褪黑素組與RIRI組活性Caspase-3陽性細胞數(shù)差值與Nrf2、HO-1陽性細胞數(shù)差值的相關(guān)性。 結(jié)果 HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，正常對照組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰完整，細胞排列整齊規(guī)則。RIRI組大鼠視網(wǎng)膜水腫明顯，視網(wǎng)膜內(nèi)層變厚，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞（RGC）數(shù)量減少。褪黑素組大鼠視網(wǎng)膜各層細胞排列較整齊，形態(tài)較規(guī)則。建模后6、24 h及3、7 d，與RIRI組比較，褪黑素組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)層厚度增厚（F=16.710、62.303、68.389、57.132，P＜0.01），RGC數(shù)量增加（F=24.250、11.624、14.155、32.442，P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。免疫組織化學染色觀察發(fā)現(xiàn)，建模后6、24 h及3、7 d，與RIRI組比較，褪黑素組大鼠視網(wǎng)膜活性Caspase-3陽性細胞數(shù)量明顯減少（F=49.118、134.173、76.225、18.385，P＜0.01），Nrf2（F=11.041、31.480、59.246、6.740，P＜0.05）、HO-1（F=128.993、21.606、51.349、8.244，P＜0.05）陽性細胞數(shù)量明顯增加，差異均有統(tǒng)計學意義。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，建模后不同時間點褪黑素組與RIRI組活性Caspase-3陽性細胞數(shù)差值與Nrf2、HO-1陽性細胞數(shù)差值均呈直線相關(guān)（r2=0.810、0.730，P＜0.01）。 結(jié)論 褪黑素可減輕RIRI大鼠視網(wǎng)膜細胞凋亡；其機制可能與促進Nrf2、HO-1蛋白表達，抑制活性Caspase-3蛋白表達有關(guān)。
目的 觀察缺血性視神經(jīng)病變視神經(jīng)組織中髓樣細胞表達觸發(fā)受體（TREM）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、白細胞介素（IL）-6的表達。 方法 Sprague Dawley大鼠20只隨機分為對照組、模型組，每組均為10只大鼠。模型組大鼠行雙側(cè)頸內(nèi)動脈結(jié)扎建立亞急性缺血性視神經(jīng)病變動物模型；對照組大鼠游離雙側(cè)頸總動脈，但不結(jié)扎。建模后14 d，實時定量聚合酶鏈反應、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測大鼠視神經(jīng)組織中TREM-1、TREM-2、Caspase-3、IL-6基因及蛋白表達。 結(jié)果 與對照組比較，模型組大鼠視神經(jīng)組織中TREM-1（tmRNA=6.058，t蛋白=9.671）、Caspase-3（tmRNA=7.86，t蛋白=9.524）、IL-6（tmRNA=6.055，t蛋白=14.501） mRNA和蛋白表達升高，TREM-2（tmRNA=6.992，t蛋白=9.283）mRNA和蛋白表達降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論 TREM-1基因和蛋白在缺血性視神經(jīng)組織中顯著表達；TREM-2基因和蛋白顯著下降。
目的探討半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3 ，Caspase-3）/ Gasdermin-E （GSDME）介導的細胞焦亡在煙草煙霧（CS）暴露誘導的骨骼肌萎縮中的作用。方法將C57BL/6小鼠暴露于煙草煙霧24周，構(gòu)建肺氣腫小鼠模型。HE染色觀察腓腸肌組織的形態(tài)學變化；免疫組化檢測腓腸肌中焦亡相關(guān)蛋白表達。用煙草煙霧提取物（CSE）處理C2C12小鼠骨骼肌細胞，建立體外骨骼肌萎縮模型。進一步采用Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK和GSDME抑制劑Dimethyl fumarate（DMF）處理C2C12細胞。觀察抑制Caspase-3/GSDME后對CSE誘導的骨骼肌萎縮的影響。用腫瘤壞死因子α（TNF-α）刺激骨骼肌細胞，觀察TNF-α對Caspase-3/GSDME蛋白表達和肌管的影響。Western blot用于測定Caspase-3和GSDME蛋白的表達水平； Hoechst33342/ Propidium Iodide（PI）雙染色檢測PI陽性細胞率；乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗檢測C2C12細胞的LDH釋放量；免疫熒光檢測C2C12肌管直徑變化。結(jié)果CS誘導小鼠腓腸肌萎縮的同時伴隨著GSDME介導的焦亡增強（P<0.05）。體外實驗結(jié)果表明，與對照組相比，CSE組C2C12細胞 cleaved-caspase-3 、GSDME-N的蛋白表達顯著增高，PI陽性率和LDH釋放率增加，肌管直徑減?。≒<0.05）。分別抑制Caspase-3和GSDME 均可明顯改善CSE誘導的骨骼肌細胞焦亡和肌管萎縮（P<0.05）。 TNF-α促進肌管萎縮和骨骼肌細胞 cleaved-caspase-3 、GSDME-N蛋白的表達。結(jié)論CS可以通過TNF-α激活caspase-3/GSDME 通路介導的焦亡，促進骨骼肌萎縮。