目的 觀察在早期糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)狀態(tài)下，缺氧誘導因子1alpha;（HIF-1alpha;）對細胞表面黏附分子CD18表達以及白細胞和血管內(nèi)皮細胞黏附的影響。方法 收集早期DR患者及年齡匹配的健康人外周血血清，用于體外培養(yǎng)人粒細胞系白血病細胞（HL60）和恒河猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞系細胞（RF/6A）。分為糖尿病血清培養(yǎng)組（B組）、糖尿病＋HIF1alpha;反義寡核苷酸組（ASODN）（C組）、糖尿?。獺IF1alpha; 正義寡核苷酸組（SODN）（D組），健康人血清培養(yǎng)細胞為正常對照組（A組）。以流式細胞儀和Real-time PCR分別檢測HL60細胞表面CD18蛋白陽性細胞比例和CD18 mRNA的表達水平，以虎紅染色法觀察HL60細胞和RF/6A細胞的黏附率。結(jié)果 A、B、C、D組CD18陽性細胞比例分別為17.06plusmn;6.01、42.23plusmn;2.60、25.33plusmn;3.05、32.40plusmn;10.57，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（F=36.47，P＜0.001）。和A組比較，B、C、D組CD18 mRNA水平分別是A組的21.05plusmn;2.07、2.23plusmn;0.96、25.07plusmn;2.27倍，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（F＝180.34，P＜0.001）。A、B、C、D組細胞黏附率分別為0.06plusmn;0.002、0.09plusmn;0.10、0.05plusmn;0.007、0.07plusmn;0.01，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（F=13.06，P=0.002）。結(jié)論 在體外培養(yǎng)條件下，糖尿病血清可以促進HL60細胞表達CD18蛋白和CD18mRNA，促進HL60細胞和血管內(nèi)皮細胞的黏附，HIF-1alpha;表達被抑制后，這種促進作用減弱。HIF-1alpha;對糖尿病狀態(tài)下細胞表面黏附分子CD18表達及白細胞和血管內(nèi)皮細胞之間的黏附具有調(diào)節(jié)作用。
目的觀察早期糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)狀態(tài)下, 以pSUPER為載體的缺氧誘導因子1α(HIF1α)特異性小干擾(siHIF1α) RNA對髓樣細胞表面黏附分子CD18及神經(jīng)損傷誘導蛋白-1(Ninj-1)表達的影響。 方法實驗分為健康人血清培養(yǎng)組(A組)、糖尿病血清培養(yǎng)組(B組)、糖尿病血清培養(yǎng)聯(lián)合pSUPERH1-siHIF1α轉(zhuǎn)染組(C組)及糖尿病血清培養(yǎng)聯(lián)合pSUPER空載體組(D組)進行。A組采用健康志愿者血清培養(yǎng)人髓樣細胞系白血病細胞系(K562)細胞; B、C、D組均采用DR患者血清培養(yǎng)K562細胞。C、D組在加入DR患者血清前24 h分別轉(zhuǎn)染pSUPERH1-siHIF1α及pSUPER空載體。采用流式細胞儀檢測各組K562細胞表面的CD18、Ninj-1表達。行細胞黏附實驗, 檢測各組K562細胞與恒河猴視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞系(RF/6A)細胞黏附率。 結(jié)果A、B、C、D組K562細胞表面CD18表達比較, 4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=14.33, P=0.01)。組間CD18表達兩兩比較, B組明顯高于A組(P=0.001);C組明顯低于B組(P=0.001)和D組(P=0.02);C組與A組間無明顯差異(95%可信區(qū)間=-14.89～2.13, P=0.12)。A、B、C、D組K562細胞表面Ninj-1表達比較, 4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=39.38, P=0.001)。組間Ninj-1表達兩兩比較, B組明顯高于A組(P=0.00);C組與B組間無明顯差異(P=0.06);C組與D組間也無明顯差異(P=0.49)。A、B、C、D組K562細胞與RF/6A細胞黏附率比較, 4組間差異有統(tǒng)計學意義(F=20.62, P=0.00)。組間K562細胞與RF/6A細胞黏附率兩兩比較, B組明顯高于A組(P=0.00);C組較B組明顯下降(P=0.01), 較A組明顯提高(P=0.002);B組與D組間無明顯差異(P=0.68)。 結(jié)論早期DR狀態(tài)下, 以pSUPER為載體的siHIF1α RNA可降低K562細胞表面CD18的表達, 但對Ninj-1表達無明顯影響。