【摘要】 急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）是一種極為嚴(yán)重且進展迅速的臨床綜合癥且最具挑戰(zhàn)性臨床醫(yī)學(xué)問題，鑒于對ALF認識不足及對患者進行研究的困難，建立準(zhǔn)確反映人ALF臨床特征的動物模型至關(guān)重要。目前ALF大動物模型眾多。主要應(yīng)用豬、狗，通過手術(shù)方法（全肝切除、部分肝切除、肝缺血）或化學(xué)藥物方法（醋氨酚、D-氨基半乳糖、四氯化碳等）建模。然而現(xiàn)今的模型都不能準(zhǔn)確地重現(xiàn)人ALF，都有其局限性?？上驳氖峭贸鲅〔《灸Ｐ涂珊芎弥噩F(xiàn)人ALF臨床生理、生化特征，但兔同人差異大。進一步嘗試建立大動物感染模型以及非人靈長類動物模型十分必要，且將是未來趨勢。
目的 研究肝細胞腹腔移植治療急性肝功能衰竭的免疫排斥反應(yīng)。方法 用膠原酶灌注法分離幼豬及BALB/c和C57BL/6小鼠肝細胞；用腹腔注射CCl4的方法建立C57BL/6急性肝功能衰竭模型；將實驗動物分為同基因移植組、同種異基因移植組和異種移植組。各組動物肝細胞移植入急性肝功能衰竭小鼠腹腔內(nèi)，觀察受體小鼠存活情況，比較各組動物T細胞亞群、免疫球蛋白水平和細胞因子的變化。結(jié)果 ①受體小鼠存活情況：同基因移植組為8/10，同種異基因移植組為6/10，異種移植組為3/10，同基因移植組和同種異基因移植組受體的生存情況明顯好于異種移植組（P＜0.05）。②T細胞亞群變化：移植后7 d內(nèi)，同基因移植組外周血中CD4+和CD8+ T細胞均無明顯變化，同種異基因移植組CD4+ T細胞于移植后3 d時達高峰（P＜0.05），而CD8+ T細胞7 d內(nèi)無明顯變化，異種移植組CD4+和CD8+ T細胞移植后7 d內(nèi)均明顯升高，且于移植后3 d時達高峰（P＜0.05）。③免疫球蛋白水平：同基因移植組血清免疫球蛋白IgM和IgG水平在移植后0.5、1和3 d時未見明顯變化，同種異基因移植組和異種移植組的IgM在移植后1 d時達高峰（P＜0.05），而IgG在移植后3 d時達高峰（P＜0.05）。④血清細胞因子水平：移植后7 d，同種異基因移植組和異種移植組的IFN-γ、TNF-α及IL-2血清濃度明顯高于同基因移植組（P＜0.05）；異種移植組的IL-6血清濃度明顯高于同基因移植組和同種異基因移植組（P＜0.05）。結(jié)論 無論同種還是異種肝細胞移植，初期均發(fā)生了強烈的CD4+及CD8+ T細胞參與的細胞免疫和較強體液免疫反應(yīng)。
目的 探討ABO血型不合的肝移植治療急性肝功能衰竭的療效。方法 回顧性分析我院急診狀態(tài)下開展的3例(布加綜合征患者1例，肝癌患者1例，重癥乙型肝炎患者1例)ABO血型不合的肝移植患者的臨床資料，術(shù)后以四聯(lián)免疫抑制劑抗排斥反應(yīng)。結(jié)果 1例布加綜合征患者術(shù)后相繼出現(xiàn)肺部感染、腦橋髓鞘溶解癥及急性排斥反應(yīng)，經(jīng)積極對癥處理后緩解，現(xiàn)已存活14個月； 1例肝癌患者術(shù)后出現(xiàn)不可控制的感染，術(shù)后13 d因多臟器功能衰竭死亡； 1例重癥乙型肝炎患者術(shù)后出現(xiàn)急性腎功能衰竭，給予持續(xù)腎臟替代療法，腎功能恢復(fù)。結(jié)論 ABO血型不合的肝移植術(shù)后并發(fā)癥多，通過加強圍手術(shù)期管理和應(yīng)用有效的免疫抑制方案，可提高ABO血型不合肝移植的療效。在無合適供體的緊急情況下，ABO血型不合的肝移植可以作為急性肝功能衰竭患者的一個重要選擇。
目的觀察人工肝支持系統(tǒng)（ALSS）治療的乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)慢加急性肝功能衰竭（ACLF）患者的轉(zhuǎn)歸，研究影響其預(yù)后的相關(guān)因素。 方法2011年1月－2014年6月收治HBV-ACLF患者321例，收集患者入院后基線及ALSS治療前后的臨床資料，進行單因素分析及多因素回歸分析，篩選出影響患者30 d預(yù)后的獨立危險因素。 結(jié)果321例患者在30 d觀察終點時，存活233例，死亡88例。單因素分析結(jié)果顯示：死亡組合并肝硬化基礎(chǔ)及肝腎綜合征、肝性腦病、腹膜炎的發(fā)生率較存活組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；死亡組的終末期肝病評分模型分值、白細胞計數(shù)、血氨、肌酐、各階段的總膽紅素水平高于存活組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；死亡組的基礎(chǔ)HBV-DNA載量、3次ALSS治療后總膽紅素下降水平、基線凝血酶原活動度及3次ALSS治療后凝血酶原活動度低于存活組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。多因素logistic回歸分析顯示白細胞計數(shù)（OR=2.337，P＜0.001）、3次ALSS治療后的總膽紅素水平（OR=4.935，P＜0.001）是預(yù)測經(jīng)ALSS治療的HBV-ACLF患者30 d死亡的獨立危險因素，HBV-DNA（OR=0.403，P＜0.001）、3次ALSS治療后總膽紅素下降水平（OR=0.447，P＜0.001）及3次ALSS治療后凝血酶原活動度水平（OR=0.332，P＜0.001）是30 d預(yù)后的保護因素。 結(jié)論白細胞計數(shù)、HBV-DNA載量、3次ALSS治療后總膽紅素及凝血酶原活動度水平、3次ALSS治療后總膽紅素下降水平是影響ALSS治療HBV-ACLF患者短期預(yù)后的5個主要因素，在臨床實踐中，將其作為判斷預(yù)后的指標(biāo)對臨床決策的制定有一定的指導(dǎo)價值。
目的探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）經(jīng)脾移植治療急性肝功能衰竭的療效，并觀察MSCs在體內(nèi)的遷徙情況。 方法收集1只SD雄性大鼠脛骨及股骨的骨髓，采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁培養(yǎng)法分離、純化及擴增雄性SD大鼠的骨髓MSCs，再行免疫組化染色以觀察第4代骨髓MSCs的表面標(biāo)志物。聯(lián)合應(yīng)用D-氨基半乳糖和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）建立24只雌性大鼠急性肝功能衰竭模型，將其隨機分為2組：實驗組（n=12）大鼠于造模后24 h行骨髓MSCs脾內(nèi)移植；空白對照組（n=12）僅于脾內(nèi)注射0.5 mL生理鹽水。2組大鼠于移植后均取血檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）及白蛋白（ALB）水平，采用PCR法檢測大鼠肝臟組織中Y性別決定區(qū)基因（SRY基因）的表達，并行HE染色觀察肝臟組織的病理學(xué)改變。 結(jié)果第4代MSCs表達CD44和CD29，但不表達CD34。MSCs移植72 h及以后，實驗組存活5只大鼠（41.7%），空白對照組存活3只大鼠（25.0%），2組大鼠的存活率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），實驗組較高。將雄性大鼠的骨髓MSCs移植于雌性大鼠的脾內(nèi)后，在雌性大鼠肝臟中能檢測到SRY基因的表達；且HE染色結(jié)果顯示，實驗組大鼠的肝功能在移植后4周明顯改善。移植后與空白對照組比較，實驗組各時點的ALT和TBIL水平均較低（P<0.05）；移植后1周和2周，實驗組的ALB水平均高于空白對照組（P<0.05）。 結(jié)論骨髓MSCs經(jīng)脾內(nèi)移植后遷徙并定居于受損的肝臟內(nèi)，可替代肝細胞的功能。
目的 探討經(jīng)門靜脈注射骨髓間充質(zhì)干細胞對急性肝功能衰竭大鼠肝臟組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β 受體（TGF-βR）1 和 TGF-βR2 的影響。 方法 選擇清潔級雄性 SD 大鼠 60 只，隨機分為正常對照組、急性肝功能衰竭組和骨髓間充質(zhì)干細胞治療組，每組 20 只大鼠。正常對照組不給予任何處理。急性肝功能衰竭組和骨髓間充質(zhì)干細胞治療組大鼠均先制備急性肝功能衰竭模型，然后骨髓間充質(zhì)干細胞治療組經(jīng)門靜脈注射骨髓間充質(zhì)干細胞，急性肝功能衰竭組給予等體積的生理鹽水。治療后第 7 天，觀察各組大鼠的存活情況，采用 HE 染色法觀察各組大鼠肝臟組織的病理學(xué)變化，TUNEL 法檢測各組大鼠的肝細胞凋亡情況，Western blot 法檢測各組大鼠肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達情況。 結(jié)果 ① 急性肝功能衰竭組術(shù)后 1 周存活率明顯低于正常對照組（P<0.05），骨髓間充質(zhì)干細胞治療組術(shù)后 1 周存活率明顯高于急性肝功能衰竭組（P<0.05）。② 急性肝功能衰竭組的肝細胞呈彌漫性壞死，小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，見大量橋接樣壞死；骨髓間充質(zhì)干細胞治療組炎性細胞浸潤減少，肝小葉結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)，周圍可見正常肝細胞。③ 急性肝功能衰竭組和骨髓間充質(zhì)干細胞治療組肝細胞凋亡指數(shù)均明顯高于正常對照組（P<0.05），而骨髓間充質(zhì)干細胞治療組的細胞凋亡指數(shù)較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05）。④ 急性肝功能衰竭組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量明顯高于正常對照組（P<0.05）；骨髓間充質(zhì)干細胞治療組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05）。 結(jié)論 骨髓間充質(zhì)干細胞在肝細胞損傷恢復(fù)中能抑制肝細胞凋亡，其機制可能與調(diào)節(jié) TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白的表達有關(guān)，但其具體調(diào)節(jié)通路需要進一步的研究。