目的 構建在視網膜組織特異性表達的人血管內皮生長因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴增能在視網膜組織特異性表達的rho啟動子，經限制性內切酶純化后克隆于質粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過限制性內切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導轉染人視網膜色素上皮細胞和人臍靜脈內皮細胞，并通過免疫組織化學染色以及繪制細胞生長曲線檢測在人視網膜色素上皮細胞和人臍靜脈內皮細胞中VEGF蛋白的表達。 結果 在人視網膜色素上皮細胞中，重組質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達強，在人臍靜脈內皮細胞，兩者的表達量無明顯差別。 結論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構建為進一步研究VEGF在視網膜新生血管形成中的致病機理提供基礎材料，并為進一步建立視網膜特異性表達VEGF轉基因鼠模型建立了基礎。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
目的 觀察阻斷p38絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)信號通路對糖尿病早期Wistar大鼠血視網膜屏障（BRB）和視網膜節(jié)細胞（RGC）的保護作用。方法 將60只大鼠分為正常對照組及糖尿病組，每組各30只大鼠。對糖尿病組大鼠進行鏈脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型，血糖值＞16.7 mmol/L為模型建立成功的判斷標準。正常對照組大鼠腹腔注射等量的枸櫞酸鈉溶液作為對照。采用IgG滲漏法量化BRB功能破壞和血管滲漏，免疫組織化學法檢測視網膜上caspase-3和 血管內皮生長因子（VEGF）的熒光表達。糖尿病鼠建模后2周，對實驗組行玻璃體腔注射p38 MAPK抑制劑 SB203580，注射后6周檢測caspase-3和 VEGF的熒光表達，caspase-3免疫熒光染色法計數RGC凋亡數量。采用SPSS 13.0應用軟件進行統計分析。結果 正常對照組大鼠中，IgG 染色局限于血管腔內，幾乎沒有滲漏的跡象。糖尿病鼠建模后8周，IgG滲漏明顯增加。SB203580璃體腔注射6周后的糖尿病鼠IgG 滲漏減少明顯。熒光免疫組織化學及相對定量分析結果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后的糖尿病鼠視網膜上VEGF熒光表達呈下降趨勢，VEGF相對熒光量從糖尿病鼠8周時較正常對照組高2.9倍減少到僅高于正常對照組1.8倍，兩者比較差異有統計學意義（t＝5.203，P＜0.01）。caspase-3免疫熒光染色法RGC凋亡計數結果顯示，SB203580玻璃體腔注射6周后，caspase-3陽性節(jié)細胞凋亡數與未注射SB203580相比明顯減少，兩者差異有統計學意義（t＝5.731，P＜0.01）。結論 p38 MAPK抑制劑 SB203580能夠減輕糖尿病早期血視網膜屏障的破壞和視網膜節(jié)細胞的調亡，提示p38 MAPK信號通路在糖尿病早期對DR的發(fā)展起著一定的作用。