目的 觀察色素上皮衍生因子（PEDF）對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酸代謝的影響。方法 Sprague-Dawley大鼠78只，分為模型組、模型對照組、PEDF干預(yù)組（干預(yù)組）、干預(yù)對照組，實驗結(jié)束時去除血糖恢復(fù)鼠和實驗期間死亡鼠，每組以12只大鼠作為統(tǒng)計樣本。模型組、干預(yù)組、干預(yù)對照組大鼠采用鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。模型組大鼠不作任何干預(yù)，模型對照組為相同月齡的正常大鼠。干預(yù)組大鼠左眼玻璃體腔注射0.1 mu;g/mu;l的PEDF 5.0 mu;l，干預(yù)對照組大鼠左眼玻璃體腔注射相同容積的磷酸鹽緩沖液。采用蛋白免疫印跡法（Western bolt）和實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法檢測視網(wǎng)膜L-谷氨酸-L-門冬氨酸轉(zhuǎn)運體（GLAST）表達(dá)的變化，高壓液相色譜法（HPLC)觀察視網(wǎng)膜谷氨酸的含量變化。將體外培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞隨機(jī)分為對照組、實驗組、PEDF干預(yù)組（干預(yù)組）和干預(yù)對照組，熒光免疫法和實時熒光PCR法檢測Muuml;ller細(xì)胞GLAST表達(dá)的改變，根據(jù)［3H］標(biāo)記的D,L ndash;谷氨酸攝入量判斷Muuml;ller細(xì)胞的攝取功能。結(jié)果 實時熒光PCR法和Western bolt檢測結(jié)果顯示，相對于模型對照組大鼠，模型組大鼠視網(wǎng)膜GLAST表達(dá)降低 (實時熒光PCR法：t=8.86, P＜0.01；Western blot：t=3.42,P＜0.05)，視網(wǎng)膜谷氨酸含量升高（t=4.01,P＜0.05）；干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜GLAST表達(dá)與干預(yù)對照組視網(wǎng)膜GLAST表達(dá)比較，干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜GLAST的表達(dá)升高(實時熒光PCR法：t=3.56,P＜0.05；Western blot：t=3.52, P＜0.05)；視網(wǎng)膜谷氨酸含量下調(diào)（t=4.36, P＜0.05）。實時熒光PCR法和熒光免疫法檢測結(jié)果顯示，高糖可以降低視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞GLAST的表達(dá)(實時熒光PCR法：t=3.48,P＜0.05；熒光免疫法：t=4.72,P＜0.05)；［3H］標(biāo)記的D,Lndash;谷氨酸攝入量結(jié)果顯示，高糖可以下調(diào)視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞GLAST的功能（t=3.81, P＜0.05）；經(jīng)PEDF處理后，可以明顯改善高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞GLAST的表達(dá)(實時熒光PCR法：t=6.82, P＜0.01；熒光免疫法：t=3.72,P＜0.05）和對谷氨酸的攝取功能（t=4.14, P＜0.05）。結(jié)論 PEDF可通過改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞中GLAST功能從而改善谷氨酸循環(huán)，抑制神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡。
目的 觀察色素上皮衍生因子（PEDF）對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞谷氨酰胺合成酶（GS）表達(dá)的影響。方法 將Sprague-Dawley大鼠分為模型組、模型對照組、PEDF干預(yù)組（干預(yù)組）、干預(yù)對照組，每組均為8只大鼠。模型組、干預(yù)組、干預(yù)對照組大鼠鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。模型組大鼠不作任何干預(yù)，模型對照組為相同月齡的正常大鼠，干預(yù)組大鼠左眼玻璃體腔注射0.1 mu;g/mu;l的PEDF 10 mu;l，干預(yù)對照組大鼠左眼玻璃體腔注射相同容積的磷酸鹽緩沖液。采用免疫組織化學(xué)法和實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測視網(wǎng)膜GS和白細(xì)胞介素-1beta;（IL-1beta;）的表達(dá)變化。將視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞置于高糖環(huán)境下培養(yǎng)，實驗干預(yù)組中加入100 ng/ml PEDF，空白對照組加入相同容積的培養(yǎng)液，24 h后通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）法和實時熒光PCR法檢測PEDF對Muuml;ller細(xì)胞GS和IL-1beta;表達(dá)的改變。流式細(xì)胞儀錨定蛋白-異硫氰酸熒光素和碘化丙啶（Annexin V-FITC-PI）雙染色法檢測100ng/mlPEDF對高糖狀態(tài)下Muuml;ller細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果 實時熒光PCR法從基因水平和免疫組織化學(xué)法從蛋白質(zhì)水平檢測均顯示，相對于模型對照組大鼠，模型組大鼠視網(wǎng)膜GS表達(dá)降低，而IL-1beta;的表達(dá)升高，實時熒光PCR法：GS: t=4.23, P＜0.01；IL-1beta;: t=16.73,P＜0.01；免疫組織化學(xué)法：GS:t=5.13,P＜0.01；IL-1beta;: t=9.32, P＜0.01；干預(yù)組大鼠玻璃體腔注射PEDF 48 h后，IL-1beta;的表達(dá)下降，GS的表達(dá)升高，與干預(yù)對照組比較，實時熒光PCR法：GS: t=3.87,P＜0.01；IL-1beta;: t=3.61,P＜0.05；免疫組織化學(xué)法：GS:t=3.32, P＜0.05；IL-1beta;: t=2.63, P＜0.05。在高糖環(huán)境下，通過實時熒光PCR法和Western bot 法檢測均顯示PEDF可以下調(diào)IL-1beta;的表達(dá)，而上調(diào)GS的表達(dá)，與空白對照組比較，實時熒光PCR法：GS: t=2.89, P＜0.05；IL-1beta;: t=3.37, P＜0.05；Western blot：GS: t=2.66, P＜0.05；IL-1beta;: t=3.23, P＜0.05。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，PEDF可以抑制高糖環(huán)境下Muuml;ller細(xì)胞的凋亡，實驗組凋亡率與空白對照組凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.21,P＜0.05)。結(jié)論 對于糖尿病大鼠，PEDF可能通過下調(diào)視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞中IL-1beta;的表達(dá)來上調(diào)GS的表達(dá)，從而改善谷氨酸循環(huán)，抑制神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡