【摘 要】 目的 尋找制備富血小板血漿 （platelet-rich plasma，PRP）的最佳離心方案，并制備PRP凝膠用于皮下注射促進(jìn)大鼠皮瓣成活，探討其有效性及作用機(jī)制。 方法 取12周齡健康Wistar大鼠72只，體重250～300 g。于24只大鼠心臟取動(dòng)脈血8～10 mL/只，分別采用3種離心方法制備PRP。A組：以200 × g離心15 min、500 × g離心10 min；B組：以312 × g離心10 min、1 248 × g離心10 min；C組：以200 × g離心15 min，200 × g離心10 min。在PRP制作過(guò)程中取各組全血、PRP及貧血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP）行血小板計(jì)數(shù)，根據(jù)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果選擇最佳離心方案，并取對(duì)應(yīng)的PRP、PPP及第1次離心后血清，采用ELISA法測(cè)定PDGF-BB和TGF-β1濃度；并制備PRP及PPP凝膠。于48只大鼠背部制備大小為11 cm × 3 cm的皮瓣，隨機(jī)分為3組（n=16）：PRP組每只大鼠皮瓣下注射100 mL PRP凝膠，PPP組同法注射100 mL PPP凝膠，對(duì)照組不作處理。術(shù)后大體觀察皮瓣成活情況，7 d后取材計(jì)算成活率；組織學(xué)觀察計(jì)數(shù)炎性細(xì)胞，免疫組織化學(xué)染色計(jì)數(shù)微血管；于術(shù)后8、24 h，3、7 d行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)VEGF、EGF、PDGF-AA和PDGF-BB mRNA表達(dá)。 結(jié)果 血小板計(jì)數(shù)結(jié)果示，A組血小板濃縮倍數(shù)最高，為最佳制備方法。A組PRP中TGF-β1、PDGF-BB濃度明顯高于血清及PPP （P lt; 0.05）。與對(duì)照組相比，術(shù)后PRP組傷口無(wú)膿性分泌物；PRP組皮瓣成活率為61.2% ± 9.1%，與PPP組35.8% ± 11.3%及對(duì)照組28.0% ± 5.4%比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。PRP組炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)較PPP組及對(duì)照組明顯減少， 微血管計(jì)數(shù)明顯高于其余兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)示與PPP組及對(duì)照組比較，PRP組VEGF及PDGF-BB mRNA術(shù)后均高表達(dá)，而EGF mRNA僅在術(shù)后24 h內(nèi)呈高表達(dá)，PDGF-AA mRNA在3 d后開(kāi)始高表達(dá)。術(shù)后3 d及7 d PRP組PDGF-AA、8 h PDGF-BB、24 h及3 d VEGF、24 h EGF的mRNA相對(duì)表達(dá)量與其他兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 以200 × g離心15 min、500 × g離心10 min是制備PRP的最佳離心方案。PRP凝膠可通過(guò)調(diào)節(jié)血管生發(fā)相關(guān)基因促進(jìn)大鼠皮瓣成活。
目的 通過(guò)觀察兔不同血管蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣模型，分析不同蒂部結(jié)構(gòu)對(duì)皮瓣成活的影響，探討穿支蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣最佳切取方法。 方法 健康新西蘭大白兔40 只，雌雄不限，體重2.5 ～ 3.0 kg。隨機(jī)取一側(cè)后肢外側(cè)設(shè)計(jì)大小為7 cm × 1 cm、蒂長(zhǎng)0.5 cm 的皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣。根據(jù)切取皮瓣蒂部的不同隨機(jī)分為4 組，每組10 只。其中A 組制備單穿支蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣，B 組為筋膜蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣，C 組為穿支筋膜蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣，D 組原位回植皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣。術(shù)后第7 天觀察皮瓣成活情況，記錄成活率；應(yīng)用激光多普勒血流探測(cè)儀監(jiān)測(cè)皮瓣中段動(dòng)脈血流灌注情況，測(cè)量血液灌流（perfusion unit，PU）值。 結(jié)果 術(shù)后A、B 組皮瓣無(wú)明顯腫脹，皮瓣近端色澤紅潤(rùn)，遠(yuǎn)端蒼白；C 組皮瓣腫脹明顯，但逐漸減退，皮瓣遠(yuǎn)端皮膚蒼白；D 組皮瓣逐漸變黑。術(shù)后第7 天，A、B、C、D組皮瓣成活率分別為74.0% ± 2.7%、60.0% ± 2.5%、75.0% ± 3.5%、0，皮瓣中段PU 值分別為83.39 ± 4.25、28.96 ± 13.49、81.85 ± 5.93、8.10 ± 3.36。以上兩指標(biāo)A、B、C 組與D 組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；A、C 組與B 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；A、C 組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 兔單穿支蒂皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣血供可靠、成活面積穩(wěn)定，早期皮瓣靜脈回流障礙發(fā)生率低，是皮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)血管皮瓣較好的切取方法。
目的 探討皮瓣移植圍術(shù)期體溫維護(hù)對(duì)皮瓣成活的影響。方法 2005年7月～2006年11月，對(duì)擇期行皮瓣移植修復(fù)術(shù)、美國(guó)麻醉醫(yī)師協(xié)會(huì)分級(jí)Ⅰ~Ⅱ級(jí)的50例患者，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組（n=25）。試驗(yàn)組采用變溫水毯和加壓空氣加熱器維持患者體溫正常，對(duì)照組不作任何處理，僅監(jiān)測(cè)溫度。每隔15 min記錄患者鼻咽溫度（pharyngeal temperature， PT）和皮膚溫度（skin temperature， ST），此外記錄手術(shù)室溫度、手術(shù)時(shí)間、麻醉時(shí)間、術(shù)畢至拔管時(shí)間、術(shù)中輸血量、術(shù)中補(bǔ)液量及術(shù)后7 d皮瓣成活情況。結(jié)果 試驗(yàn)組與對(duì)照組手術(shù)室溫度、麻醉時(shí)間、手術(shù)時(shí)間、術(shù)中輸血量及補(bǔ)液量，各指標(biāo)組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。麻醉后45 min，試驗(yàn)組與對(duì)照組PT均下降，與插管時(shí)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試驗(yàn)組與對(duì)照組ST均升高，與插管時(shí)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。麻醉45 min后，試驗(yàn)組PT維持在36℃，而ST與插管時(shí)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對(duì)照組PT和ST隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降，與插管時(shí)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；試驗(yàn)組各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)PT和ST均高于對(duì)照組（P＜0.05）。試驗(yàn)組皮瓣均成活，對(duì)照組2例皮瓣發(fā)生壞死。結(jié)論 術(shù)中維護(hù)患者的正常體溫有助于提高皮瓣成活率，麻醉醫(yī)師在皮瓣移植術(shù)中應(yīng)進(jìn)行體溫監(jiān)測(cè)并應(yīng)積極維持正常體溫。
目的 將皮瓣延遲與采用血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)對(duì)皮瓣成活的影響進(jìn)行對(duì)比研究。方法 3月齡SD大鼠30只，隨機(jī)分為生理鹽水組、皮瓣延遲組及VEGF組，每組10只。應(yīng)用背部超長(zhǎng)、寬比隨意皮瓣模型。皮瓣延遲組采用雙蒂皮瓣延遲，延遲時(shí)間為7 d，之后斷頭端蒂，形成蒂部位于尾端的單蒂皮瓣；VEGF組形成單蒂皮瓣，于皮瓣中、遠(yuǎn)段均勻分為4點(diǎn)，局部皮下注射含400 ng VEGF溶液100 μl；生理鹽水組于局部皮下注射生理鹽水100 μl，余同VEGF組。單蒂皮瓣完全形成后5 d，計(jì)算皮瓣成活率，切取皮瓣組織，進(jìn)行微血管密度分析、微血管直徑測(cè)量和微血管斷面面積測(cè)量。結(jié)果 VEGF組皮瓣成活率與皮瓣延遲組接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。皮瓣延遲組內(nèi)部微血管平均直徑明顯大于VEGF組和生理鹽水組，VEGF組皮瓣內(nèi)部微血管密度明顯大于生理鹽水組和皮瓣延遲組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。皮瓣延遲組和VEGF組相比，其微血管斷面面積接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 皮瓣延遲后皮瓣內(nèi)部主要表現(xiàn)為微血管擴(kuò)張，應(yīng)用VEGF后，皮瓣內(nèi)部主要表現(xiàn)為微血管增生。二者均能有效增加皮瓣內(nèi)部微血管斷面面積，提高皮瓣成活率，但其作用途徑不同。
目的 研究撕脫皮瓣修剪制成真皮下血管網(wǎng)薄皮瓣后對(duì)皮瓣成活面積的影響。方法 采用 3～ 4月齡白色約克夏小豬 7頭，麻醉后在自行研制的皮膚撕脫傷模型機(jī)中復(fù)制撕脫傷模型，將一側(cè)的撕脫皮瓣制成真皮下血管網(wǎng)薄皮瓣，另一側(cè)為撕脫皮瓣，原位縫合 ;7天后，對(duì)兩側(cè)皮瓣的成活和壞死面積進(jìn)行測(cè)量和計(jì)算分析。結(jié)果 修剪制成真皮下血管網(wǎng)薄皮瓣后的成活面積為 (60.90±15.26)%，而撕脫皮瓣組的成活面積為(40.41±9.23)%，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩組有顯著差異(Plt;0.05)。結(jié)論 皮膚撕脫傷撕脫皮瓣修剪制成真皮下血管網(wǎng)薄皮瓣后增加了成活面積。
目的探討天然水蛭素聯(lián)合高壓氧治療對(duì)大鼠隨意皮瓣成活的影響。方法取 72 只 SD 大鼠，于背部制備面積為 10.0 cm×2.5 cm 的隨意皮瓣移植模型后，隨機(jī)分為 4 組（n=18）。對(duì)照組術(shù)后即刻及之后 4 d 內(nèi)注射生理鹽水，高壓氧組注射生理鹽水同時(shí)行高壓氧治療，水蛭素組僅注射天然水蛭素，聯(lián)合組注射天然水蛭素同時(shí)行高壓氧治療。術(shù)后大體觀察皮瓣成活情況，第 6 天計(jì)算皮瓣成活率；第 2、4 天取材，HE 染色觀察皮瓣組織學(xué)變化；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)皮瓣微血管密度（microvessel density，MVD）以及 TNF-α 表達(dá)水平。結(jié)果術(shù)后各組皮瓣均出現(xiàn)部分壞死，其中聯(lián)合組皮瓣成活最佳；術(shù)后第 6 天高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組皮瓣成活率明顯高于對(duì)照組，聯(lián)合組高于水蛭素組、高壓氧組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；水蛭素組與高壓氧組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。組織學(xué)觀察示，術(shù)后第 2 天，水蛭素組、高壓氧組及聯(lián)合組微血管結(jié)構(gòu)較對(duì)照組多，各組均見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；第 4 天，高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組中仍可見(jiàn)較多微血管形成，對(duì)照組中見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，其余各組炎性細(xì)胞均較術(shù)后第 2 天時(shí)明顯減少。免疫組織化學(xué)染色觀察示，術(shù)后第 2 天，高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組 MVD 均顯著高于對(duì)照組、TNF-α 蛋白表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組以上指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。術(shù)后第 4 天，高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組 MVD 均顯著高于對(duì)照組，聯(lián)合組及水蛭素組高于高壓氧組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），聯(lián)合組及水蛭素組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高壓氧組、水蛭素組及聯(lián)合組 TNF-α 蛋白表達(dá)量顯著低于對(duì)照組，聯(lián)合組低于水蛭素組及高壓氧組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），水蛭素組及高壓氧組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論高壓氧和天然水蛭素干預(yù)均能提高隨意皮瓣移植后成活率，且兩者聯(lián)合發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，可能與促進(jìn)血管生成和減輕炎性反應(yīng)有關(guān)。