目的 探討L-精氨酸(L-arginine, L-Arg)和左旋-硝基精氨酸甲酯(L-nitro-arginine-methylester, L-NAME)對(duì)純化培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal gangal cells, RGCs)凋亡的影響。 方法 同化培養(yǎng)液培養(yǎng)抗體純化的Sprague-Dawley(SD)系大鼠RGCs;在純化培養(yǎng)的RGCs中分組加入體積百分濃度為1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1 mol/L的L-Arg及L-NAME,培養(yǎng)24 h后檢測(cè)各組培養(yǎng)上清液中硝酸鹽含量、細(xì)胞的活性;培養(yǎng) 48 h后檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞中bcl-2、bax及p53 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 培養(yǎng)上清液中硝酸鹽含量隨著L-Arg體積百分濃度的增高而增高,隨著L-NAME體積百分濃度的升高而降低。低體積百分濃度時(shí),隨著L-Arg和L-NAME體積百分濃度的增加bcl-2 mRNA表達(dá)逐漸增高,bax及p53 mRNA的表達(dá)無(wú)明顯變化。而高體積百分濃度時(shí)則相反。 結(jié)論 L-Arg低體積百分濃度時(shí)能促進(jìn)RGCs的生長(zhǎng),高體積百分濃度時(shí)則促進(jìn)細(xì)胞凋亡;L-NAME對(duì)L-Arg的毒害作用則起抑制作用。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 137-139)
目的 觀(guān)察巢蛋白(nestin)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)在大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育中的動(dòng)態(tài)變化。方法 48只Wistar大鼠,其中24只大鼠分為出生后1 d,1、2、3、4、7、12、20周8組,每組3只。制作眼球矢狀位冰凍切片,采用共聚焦激光顯微鏡觀(guān)察nestin和谷氨酰胺合成酶(GS)以及GFAP和GS免疫熒光染色情況。18只大鼠分為出生后1d,1、2、3、4、12周,每組3只。提取大鼠視網(wǎng)膜總RNA,實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)nestin、GFAP和GS mRNA表達(dá)。選擇6只出生后7~12 d新生鼠,取眼球體外培養(yǎng)Müller細(xì)胞,行GS和(或)nestin免疫熒光染色,共聚焦激光顯微鏡觀(guān)察熒光染色情況。結(jié)果 出生后1 d, nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞貫穿神經(jīng)視網(wǎng)膜全層,主要定位于視網(wǎng)膜前體細(xì)胞放射狀排列的細(xì)長(zhǎng)纖維中,在視網(wǎng)膜內(nèi)側(cè)出現(xiàn)GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞。出生后1周出現(xiàn)表達(dá)GS的Müller細(xì)胞,同時(shí)表達(dá)nestin,但不表達(dá)GFAP;GFAP陽(yáng)性細(xì)胞仍然位于視網(wǎng)膜內(nèi)側(cè)。出生后2~12周,nestin在Müller細(xì)胞上的表達(dá)逐漸減少直至消失,GFAP在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度沒(méi)有顯著變化。體外培養(yǎng)的Müller細(xì)胞表達(dá)nestin,不表達(dá)GFAP。Nestin和GFAP mRNA在視網(wǎng)膜中的表達(dá)與免疫熒光染色結(jié)果相一致。結(jié)論 隨大鼠視網(wǎng)膜不斷發(fā)育,Müller細(xì)胞上nestin表達(dá)逐漸減少,成年大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞不再表達(dá)nestin;新生鼠和成年鼠Müller細(xì)胞均不表達(dá)GFAP。