目的在體外環(huán)境下同時下調(diào)細胞中Noggin基因和增加BMP-14基因，觀察對脂肪來源干細胞（adipose derived stem cells，ADSCs）成骨分化能力的影響。 方法取健康成年SD大鼠5只，體質(zhì)量250～300 g，采用Ⅰ型膠原酶消化法獲取原代ADSCs，體外培養(yǎng)、擴增。使用慢病毒載體將目的基因轉(zhuǎn)染大鼠ADSCs，根據(jù)目的基因不同將實驗分為3組，A組為空載體病毒Lv-增強型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染對照組，B組為Lv-BMP-14轉(zhuǎn)染組，C組為BMP-14+Noggin shRNA轉(zhuǎn)染組。分別于轉(zhuǎn)染后3、7、14 d，采用實時熒光定量PCR檢測BMP-14及成骨相關基因[Ⅰ型膠原、ALP、骨鈣素（osteocalcin，OCN）]的表達，轉(zhuǎn)染后14 d采用茜素紅染色鑒定其成骨分化能力。 結果轉(zhuǎn)染后3 d，各組BMP-14 mRNA相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；7、14 d，C組BMP-14 mRNA相對表達量高于A、B組，B組高于A組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。轉(zhuǎn)染后3 d，C組各成骨相關基因mRNA相對表達量顯著高于A、B組（P＜0.05）；A、B組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。轉(zhuǎn)染后7、14 d，C組各成骨相關基因mRNA相對表達量顯著高于A、B組，B組高于A組，除轉(zhuǎn)染后7 d A、B組間Ⅰ型膠原mRNA相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）外，其余各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。轉(zhuǎn)染后14 d茜素紅染色示，A、B、C組鈣結節(jié)量呈遞增趨勢。 結論BMP-14具有增強大鼠ADSCs向成骨細胞分化的能力；沉默細胞中的Noggin基因、聯(lián)合BMP-14基因共同作用于大鼠ADSCs，其體外成骨分化能力明顯強于BMP-14單基因轉(zhuǎn)染，兩者有顯著的協(xié)同作用。
【摘要】 目的 探討骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）對室管膜前下區(qū)（anterior subventricular zone，SVZa）神經(jīng)干細胞DLX5表達的影響?！》椒ā◇w外培養(yǎng)SVZa神經(jīng)干細胞，用BMP-2及其拮抗劑Noggin誘導SVZa神經(jīng)干細胞，分別用免疫熒光染色和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測DLX5表達變化?！〗Y果 BMP-2組SVZa神經(jīng)干細胞DLX5蛋白表達和DLX5mRNA表達水平明顯高于對照組（Plt;0.05），且該效應能被其拮抗劑Noggin特異性地抑制?！〗Y論 BMP-2是DLX5上游調(diào)節(jié)基因，可促進SVZa神經(jīng)干細胞DLX5的表達。【Abstract】 Objective To investigate the effect of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2)on expression of DLX5 of neural stem cells in anterior subventricular zone (SVZa). Methods The neural stem cells of SVZa were separated and cultured in vitro, which were induced by BMP-2 and Noggin.Immunofluorescence staining and RT-PCR were employed to assay the expression of DLX5. Results The percentages of expression of DLX5 protein and DLX5 mRNA in BMP-2 group were much higher than those in the control group (Plt;0.05). And this induction could be specifically blocked by Noggin. Conclusion BMP-2 is an upstream gene of DLX5; BMP-2 can promote the expression of DLX5 of the neural stem cells of SVZa.