目的 通過研究大鼠股骨干骨折合并腦外傷時骨痂組織內(nèi)PDGF 表達(dá)水平的變化,探討腦外傷對骨折愈合的影響及作用機(jī)制。 方法 取12 周雄性SD 大鼠64 只,體重(356 ± 25)g,隨機(jī)分成8 組,每組8 只。A1、B1、C1、D1 組分別為骨折合并腦外傷1、2、3、4 周組,制作腦外傷和股骨干骨折模型;A2、B2、C2、D2 組分別為單純骨折1、2、3、4 周組,制作單純股骨干骨折模型作對照。各組攝CR 片后截取骨痂,行HE 染色觀察骨痂生長情況及其組織形態(tài),免疫組織化學(xué)染色測定PDGF 表達(dá),原位雜交檢測PDGF mRNA 表達(dá)。 結(jié)果 CR 片示在同一時間點(diǎn)A1、B1、C1、D1 組較A2、B2、C2、D2 組骨折端骨痂形成早,骨痂多,骨折愈合快。HE 染色示A1 組可見較多早期軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞,A2組骨折間隙可見成纖維細(xì)胞,僅夾雜有少量的早期軟骨細(xì)胞;B1 組骨折端有新生骨小梁長入,B2 組未見骨小梁形成;C1組骨折端有大量編織骨形成且骨小梁間有少量成熟軟骨細(xì)胞,C2 組少量骨小梁向骨折端長入;D1 組編織骨向板層骨轉(zhuǎn)化,D2 組骨折端為不成熟骨小梁。免疫組織化學(xué)染色和原位雜交實(shí)驗均可見成纖維細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、早期軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞胞漿出現(xiàn)廣泛的強(qiáng)陽性反應(yīng),A1、B1、C1、D1 組PDGF 和PDGF mRNA 陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)均高于同一時間點(diǎn)A2、B2、C2、D2 組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 腦外傷對骨折愈合有促進(jìn)作用,可能與腦外傷后PDGF 表達(dá)水平升高有關(guān)。
目的觀察比較人正常和退變髓核的細(xì)胞學(xué)和生物學(xué)差異,并研究 IFG-1 和 PDGF 對人退變髓核的修復(fù)作用。方法取患者自愿捐贈的人退變及正常髓核組織,一部分制作成組織切片,進(jìn)行 HE 染色觀察髓核退變前后形態(tài)變化,免疫組織化學(xué)染色觀察Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、B 淋巴細(xì)胞瘤 2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2 相關(guān) X(Bcl-2 associate X,Bax)蛋白表達(dá);另一部分髓核組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),Western blot 檢測Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)。然后進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗,分為 4 組,A 組為退變髓核細(xì)胞;B、C、D 組分別用 IGF-1 基因慢病毒顆粒、PDGF 基因慢病毒顆粒和攜帶 IGF-1、PDGF 雙基因的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染退變髓核細(xì)胞。轉(zhuǎn)染 21 d,倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀測定各組細(xì)胞 IGF-1 和 PDGF 陽性率,免疫組織化學(xué)染色和 Western blot 檢測各組細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)。結(jié)果HE 染色示,正常組中央髓核組織可見大量脊索細(xì)胞和少量類軟骨細(xì)胞;而退變組髓核細(xì)胞明顯減少,且髓核組織內(nèi)可見大量纖維軟骨組織。免疫組織化學(xué)染色示,退變組Ⅰ型膠原、Bax 蛋白陽性細(xì)胞百分比顯著高于正常組,Ⅱ型膠原、Bcl-2 蛋白陽性細(xì)胞百分比顯著低于正常組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Western blot 檢測示,退變組Ⅱ型膠原蛋白相對表達(dá)量顯著低于正常組(t=65.493,P=0.000)?;蜣D(zhuǎn)染后 21 d,與 A 組比較,B、C、D 組細(xì)胞活性增加,形態(tài)變得較為規(guī)則。流式細(xì)胞儀檢測示 B、D 組 IGF-1 陽性率較 A 組明顯增高,C、D 組PDGF 陽性率較 A 組明顯增高(P<0.05)。免疫組織化學(xué)染色觀察示,A、B、C、D 組Ⅱ型膠原蛋白陽性染色情況依次為(±)、(+)、(+)、(++)。Western blot 檢測示,A、B、C、D 組Ⅱ型膠原蛋白相對表達(dá)量依次增加,各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論IGF-1 與 PDGF 均能逆轉(zhuǎn)椎間盤髓核細(xì)胞的退變且二者具有協(xié)同作用,為其今后應(yīng)用于臨床治療椎間盤退變性疾病提供了實(shí)驗依據(jù)。