血管內(nèi)皮細胞（vascular endothelial cell，VEC）是襯于血管內(nèi)表面的單層扁平上皮細胞，是血液與組織的之間的重要屏障。它在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，血栓形成，內(nèi)皮細胞介導(dǎo)的血管舒張，內(nèi)皮再生等病理生理過程中起關(guān)鍵作用，這些過程受到多種復(fù)雜機制的調(diào)控。隨著人們對于血管內(nèi)皮細胞功能研究的深入，microRNA在內(nèi)皮細胞發(fā)揮其功能時的調(diào)控作用受到越來越多的關(guān)注。多種microRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達，影響內(nèi)皮細胞的功能，本文對microRNA在內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)、血栓形成、血管舒張、內(nèi)皮再生功能的調(diào)節(jié)機制進行綜述。
目的 探討預(yù)存糖原對肝部分切除術(shù)中熱缺血再灌注損傷的保護作用。方法 將38 例Child A-B 級擬行肝部分切除的原發(fā)性肝癌患者按入院順序分為試驗組及對照組，每組19 例。試驗組于術(shù)前24 h 內(nèi)靜脈滴注高濃度葡萄糖，對照組不做特殊處理。兩組患者均采用阻斷第一肝門方法行病變肝臟切除術(shù)。抽血檢驗所有患者術(shù)前及術(shù)后第1、5 天的肝功能情況。分別于缺血前、缺血后及再灌注2 h 獲取正常肝組織，檢測所有患者肝組織糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用實時定量PCR 方法檢測肝門阻斷前及再灌注2 h 后肝組織Bcl- 2 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 試驗組肝組織糖原含量明顯高于對照組（Plt;0.01），術(shù)后第1、5 天肝臟功能優(yōu)于對照組（Plt;0.05），在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于對照組（Plt;0.05），再灌注2 h 后試驗組Bcl-2 mRNA 表達上調(diào)高于對照組。結(jié)論 術(shù)前預(yù)存糖原可顯著減輕患者肝切除術(shù)中因?qū)嵤└伍T阻斷所導(dǎo)致的缺血再灌注損傷，其機制可能與預(yù)存糖原上調(diào)肝臟Bcl-2 mRNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)。
目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因?qū)CF-7細胞凋亡的誘導(dǎo)及對化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對DLL4基因的序列設(shè)計具有特異性的shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MCF-7細胞，作為實驗組，空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的MCF-7細胞為脂質(zhì)體組，未做任何處理的MCF-7細胞為對照組。采用免疫細胞化學(xué)方法檢測3組細胞DLL4蛋白的表達情況；采用流式細胞儀檢測3組細胞凋亡率及細胞周期改變；采用噻唑藍（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測定3組細胞的增殖情況及對多西他賽的敏感性。結(jié)果 實驗組平均光密度值及陽性面積率均低于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）；實驗組細胞在24h、48h及72h時間點A值均低于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）； 轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h及96 h，實驗組細胞凋亡率高于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實驗組G2/M期細胞比例高于對照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；實驗組的IC50值較對照組和脂質(zhì)體組低（P＜0.05）。結(jié)論 RNAi技術(shù)抑制DLL4基因的表達能夠抑制MCF-7細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡及增強細胞對多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會成為乳腺癌治療的重要靶點。
目的 構(gòu)建信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT 3）基因短發(fā)夾RNA（shRNA）表達質(zhì)粒，探討STAT 3抑制后對胃癌MKN-45細胞增殖、凋亡和侵襲的影響。 方法 根據(jù)STAT 3 mRNA 編碼序列，設(shè)計RNA干擾靶點，構(gòu)建STAT 3基因的特異性小RNA干擾質(zhì)粒 （psiRNA-H1/STAT 3） ，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MKN-45細胞，實驗分為對照組、psiRNA-H1轉(zhuǎn)染組和psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組。通過RT-PCR和Western blot檢測STAT 3特異性小RNA干擾基因?qū)ξ赴┘毎鸖TAT 3 mRNA和蛋白表達的影響； MTT比色法檢測細胞的生長抑制率； 采用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后對MKN-45細胞凋亡的影響； 采用Boyden小室侵襲實驗檢測轉(zhuǎn)染后MKN-45細胞侵襲力的變化。結(jié)果 成功轉(zhuǎn)染重組體的MKN-45細胞中STAT 3 mRNA和蛋白表達明顯下降（ P ＜ 0.05）。psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組各時相均明顯抑制MKN-45細胞生長，且MKN-45細胞凋亡率為34.26% ，相比對照組（3.75% ）和psiRNA-H1轉(zhuǎn)染組（4.43% ）明顯升高（ P ＜ 0.01） 。另外，psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組MKN-45細胞侵襲力較另外2組明顯減弱（ P ＜ 0.01）。結(jié)論 成功構(gòu)建了針對STAT 3基因的shRNA表達載體，通過轉(zhuǎn)染MKN-45細胞，在體外能有效抑制人胃癌細胞STAT 3 mRNA和蛋白表達，細胞增殖、侵襲能力減弱并且促進細胞凋亡，為STAT 3基因靶向治療提供一定的實驗依據(jù)。
目的 研究內(nèi)皮素-3(endothelin-3,ET-3)mRNA的表達水平與急性胰腺炎時胰腺炎癥程度的關(guān)系。方法 將54只SD大鼠編號后隨機分為4組，其中假手術(shù)組9只，胰腺炎組、動脈給藥組和靜脈給藥組〔多巴胺： 5 μg/（kg·min）〕各15只，按Aho法用4.5%牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射制作急性胰腺炎模型，分別在1、6及24 h取胰腺組織,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)檢測ET-3基因的轉(zhuǎn)錄水平，并觀察各組胰腺組織病理變化，確定ET-3 mRNA的表達水平與胰腺炎炎癥程度的關(guān)系。結(jié)果 模型制作后1、6及24 h均可見到ET-3 mRNA表達，各組（除假手術(shù)組外）均以6 h時ET-3 mRNA表達最強。除1 h外，動脈給藥組ET-3 mRNA表達量明顯低于靜脈給藥組及胰腺炎組（P＜0.05，P＜0.01）； 而假手術(shù)組在任何時相均明顯低于另外3組（P＜0.05，P＜0.01）。各組胰腺組織病理學(xué)評分按假手術(shù)組→動脈給藥組→靜脈給藥組→胰腺炎組的順序逐漸升高。結(jié)論 ET-3 mRNA的表達與胰腺炎炎癥程度有一定關(guān)系，ET-3 mRNA表達量隨胰腺炎嚴重程度的加重而增加； 急性胰腺炎中，多巴胺動脈給藥比靜脈給藥有效。
目的 運用siRNA技術(shù)在肝癌細胞株中建立穩(wěn)定低表達人胰島素樣生長因子1類受體（IGF1R）基因的細胞株。方法 構(gòu)建包含封閉IGF1R基因的真核表達載體pSUPER-IGF1R-siRNA，轉(zhuǎn)染SMMC7721和Hep3B細胞，G418篩選表達穩(wěn)定的細胞株。通過RT-PCR、Western-blot分析與鑒定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclin B1蛋白的表達，并繪制細胞生長曲線。結(jié)果 在SMMC7721和Hep3B細胞中成功建立低表達IGF1R基因的細胞株，其生長明顯減慢(P＜0.05),且其cyclin D1表達亦明顯下降(P＜0.05)。結(jié)論 pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B細胞的生長。
目的 研究RNA干擾(RNAi)對兔血管平滑肌細胞（VSMCs）bcl-2基因表達的干擾效應(yīng)。方法 用脂質(zhì)體法將構(gòu)建的裝載靶向bcl-2基因小干擾性RNA(siRNA)的表達載體(pshRNA-bcl-2質(zhì)粒)轉(zhuǎn)染VSMCs（基因組），以轉(zhuǎn)染空載體的細胞和加DMEM的空白細胞作為對照，采用半定量RT-PCR 和Western blot法檢測bcl-2基因的表達，用MTT法檢測VSMCs生長情況。結(jié)果 轉(zhuǎn)染siRNA的表達載體可以抑制內(nèi)源性bcl-2基因在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯水平上的表達，基因組bcl-2的mRNA和蛋白表達較空載體組和空白對照組明顯減少(P＜0.01)； 基因組的VSMCs生長也較空載體組和空白對照組明顯受到抑制(P＜0.01)。結(jié)論 載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)可明顯抑制內(nèi)源性bcl-2基因的表達和VSMCs生長
【摘要】目的 探討RNA干擾(RNA interference， RNAi)技術(shù)在大腸癌基因治療研究中的應(yīng)用。方法 復(fù)習(xí)近幾年的相關(guān)文獻并進行綜述。結(jié)果 RNAi能夠高效特異地沉默同源基因表達，可在大腸癌發(fā)生、發(fā)展多個環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。結(jié)論 RNAi技術(shù)為大腸癌基因治療研究開辟了新的途徑。
目的觀察反義DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b（DNMT3b）基因真核表達載體轉(zhuǎn)染對人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因表達的影響。方法構(gòu)建反義DNMT3b基因真核表達載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到人膽管癌細胞株QBC-939中，G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，PCR鑒定外源性neoR基因在轉(zhuǎn)染細胞中的表達以確定轉(zhuǎn)染是否成功。半定量RT-PCR觀察轉(zhuǎn)染前后DNMT3b基因mRNA水平的變化，流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后DNMT3b蛋白的變化。 結(jié)果反義DNMT3b基因真核表達載體轉(zhuǎn)染能使人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的mRNA水平從0.956±0.053降低至0.209±0.023，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）； 流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，DNMT3b蛋白水平從(75.38±3.22)%降低到(29.87±3.46)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論反義DNMT3b基因轉(zhuǎn)染能降低人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的表達水平，為研究DNMT3b基因功能及其在膽管癌細胞中的作用提供了方法和實驗依據(jù)。
目的 探討大腸癌患者外周血CK20 mRNA的表達及其意義。 方法 用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測42例大腸癌患者術(shù)前、術(shù)后外周血及20例大腸癌患者新鮮癌組織標(biāo)本中CK20 mRNA的表達，另以20例健康成年自愿者作對照。 結(jié)果 42例大腸癌患者外周血CK20 mRNA呈陽性表達者術(shù)前為19例（45.24%），術(shù)后為14例（33.33%）； 20例大腸癌患者新鮮癌組織中CK20 mRNA表達均為陽性。而正常對照組20例外周血CK20 mRNA表達均為陰性。且大腸癌外周血CK20 mRNA陽性表達與組織學(xué)類型無關(guān)（Pgt;0.05），但與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移及Dukes分期有關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論 檢測外周血中CK20 mRNA表達將有助于大腸癌的早期診斷、預(yù)后的判斷及治療方案的制定。