目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達(dá)變化及其信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個(gè)小組, 每小組6 只。對(duì)照組鼻內(nèi)接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預(yù)組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內(nèi)接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應(yīng)的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA 的表達(dá),ELISA 法測(cè)定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時(shí)觀察肺組織病理變化。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開(kāi)始下降。PDTC 早期干預(yù)可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達(dá), 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對(duì)小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達(dá)水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對(duì)小鼠肺組織TNF-α表達(dá)均有抑制作用, SB203580 對(duì)TNF-α的抑制作用強(qiáng)于PDTC。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達(dá)的增加。對(duì)p38MAPK 和 NF-κB 的干預(yù)均影響TLR2 的表達(dá)以及炎癥介質(zhì)的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過(guò)TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導(dǎo)致肺部炎癥反應(yīng)。
目的 通過(guò)建立小鼠肺炎衣原體感染的模型, 探討小鼠感染肺炎衣原體后, 其信號(hào)通路Toll 樣受體2( TLR2) -p38 蛋白激酶( p38MAPK) 中TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 的表達(dá)變化及其信號(hào)通路抑制劑對(duì)其影響以及炎癥介質(zhì)表達(dá)變化的意義。方法 使用TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 72 只, 隨機(jī)分為正常組、肺炎衣原體感染組、肺炎衣原體感染加特異性p38MAPK 抑制劑SB203580 干預(yù)組, 分別按接種后1、4、7 及14 d 各分4 組。正常組鼻內(nèi)接種2SP 緩沖液, 感染組鼻內(nèi)接種肺炎衣原體; 干預(yù)組在感染肺炎衣原體后即在腹腔注射SB203580, 分別在預(yù)定的時(shí)間處死, 取肺臟組織應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 半定量方法檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA的表達(dá)變化, 用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA) 測(cè)定TNF-α的含量。結(jié)果 與正常組比較, 感染肺炎衣原體后小鼠肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 最明顯, 其中TLR2mRNA 在第7 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 7. 24 ±1. 78) mg/L 比( 0. 64 ±0. 14) mg/L] , p38MAPK mRNA 在第4 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 9. 267 ±1. 813) mg/L 比( 3. 734 ±0. 946) mg/L] , 14 d 以后感染開(kāi)始減輕。其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)也升高, 并明顯高于正常組, 以第4 d 為高峰( 77. 29 ±9. 66) pg/mg。給予SB203580 抑制劑后TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)明顯減弱, 以第4 d 和第7 d 明顯, 其中TLR2 mRNA 在第7 d 為( 0. 269 ±0. 09) mg/L, p38 MAPK mRNA 在第4 d為( 0. 002 ±0. 001) mg/L, 其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)與感染組比較也明顯降低, 以第4 d( 25. 76 ±3. 49) pg/mg 明顯。結(jié)論 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路的活化, 引起細(xì)胞因子的釋放。SB203580 對(duì)TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路有明顯的抑制作用, 并能抑制炎癥介質(zhì)的釋放, 表明肺炎衣原體感染與TLR2-p38MAPK 的信號(hào)通路密切相關(guān)。