目的 椎間盤退行性變的生物學(xué)治療方法是骨科學(xué)研究熱點，尋找一種有效誘導(dǎo)BMSCs 向椎間盤細胞分化的方法成為應(yīng)用細胞移植治療椎間盤退變的必要前提。探討重組質(zhì)粒 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 體外轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)兔BMSCs 向類髓核細胞分化的影響。 方法 構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取1 月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，體外誘導(dǎo)BMSCs 向成骨細胞分化并鑒定；流式細胞儀檢測細胞表面標記。將第3 代BMSCs 隨機分為轉(zhuǎn)染組、陰性對照組和空白對照組。轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染pcDNA3.1IE-SOX9Flag 重組質(zhì)粒，陰性對照組轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1，空白對照組不轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒。將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag 轉(zhuǎn)染第3 代BMSCs，72 h 后加入濃度為500 mg/L 的G418 篩選7 d 后，改為濃度200 mg/L 的G418 維持篩選壓力并培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細胞。取各組BMSCs 采用RT-PCR 檢測SOX9和Ⅱ型膠原基因（Col2al）的mRNA 表達，Western blot 檢測SOX9 蛋白的表達，免疫組織化學(xué)染色觀察Ⅱ型膠原的表達。 結(jié)果 BMSCs 成骨誘導(dǎo)7 d 后ALP 染色呈陽性；CD44 表達陽性，CD34 和CD45 表達陰性。成功構(gòu)建了真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔BMSCs，72 h 后轉(zhuǎn)染效率為34.32% ± 1.75%；轉(zhuǎn)染2 周后BMSCs 形態(tài)改變，呈多角形或橢圓形，細胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細胞生長特點十分接近。RT-PCR 鑒定發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細胞SOX9 mRNA 和Col2al mRNA 表達陽性，對照組均為陰性。Western blot 檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組SOX9 基因蛋白表達陽性，對照組未見表達。轉(zhuǎn)染組BMSCs 的Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色呈陽性。 結(jié)論 SOX9 基因真核表達載體成功轉(zhuǎn)染兔BMSCs，被轉(zhuǎn)染的干細胞向類髓核細胞分化，為進一步研究應(yīng)用BMSCs 移植治療椎間盤退行性變奠定了理論基礎(chǔ)。