目的 比較采用兩種不同方法接種的hBMSCs 在生物珊瑚支架中的三維空間分布和基因表達(dá)。 方法 采用傳統(tǒng)接種法（A 組）和纖維蛋白凝膠接種法（B 組）構(gòu)建hBMSCs 和生物珊瑚支架復(fù)合體。A 組孵育3 h，B 組孵育30 min 后檢測(cè)兩組細(xì)胞接種效率。培養(yǎng)后2、7、14、21 d，兩組分別取材行DAPI 染色后，熒光顯微鏡觀察，采用AxioVision 圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)切片10 倍物鏡視野中的細(xì)胞數(shù)量，以切片的不同水平區(qū)域（從表面到底部為L(zhǎng)1 ～ L5）和垂直區(qū)域（從中心到邊緣）比較兩組細(xì)胞分布情況；采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測(cè)成骨分化基因骨凝集素（osteonectin，ON）、核心結(jié)合因子α1（core binding factor α1，Cbfα1）和骨鈣素（osteocalcin，OC）表達(dá)。 結(jié)果 B 組細(xì)胞接種效率為88.32% ± 4.20%，明顯高于A組66.51% ± 12.33%（P lt; 0.01）。培養(yǎng)后2 d，兩組細(xì)胞水平區(qū)域分布由L1 ～ L4 逐漸減少（P lt; 0.05）；垂直區(qū)域細(xì)胞數(shù)目比較，A 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），B 組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；兩組間各成骨分化基因表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。培養(yǎng)后 7 d，A 組細(xì)胞數(shù)目較2 d 時(shí)逐步減少，各水平區(qū)域間細(xì)胞數(shù)目比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），而B(niǎo) 組細(xì)胞數(shù)目和各成骨分化基因表達(dá)量迅速增加，各水平區(qū)域細(xì)胞數(shù)目趨于平衡，細(xì)胞分布均勻（P gt; 0.05），ON 和Cbfα1 基因表達(dá)量明顯高于A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt; 0.05）。培養(yǎng)后14 d，A 組各水平及垂直區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目均較7 d 時(shí)急速減少（P lt; 0.05），B 組細(xì)胞增殖良好且細(xì)胞總數(shù)與7 d 時(shí)相近；B 組OC 基因表達(dá)量達(dá)峰值，兩組間各基因表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt; 0.05）。培養(yǎng)后21 d，兩組各水平區(qū)域細(xì)胞數(shù)目和兩組間各基因表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；兩組各垂直區(qū)域細(xì)胞數(shù)目比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt; 0.05）。培養(yǎng)后714、21 d，B 組大部分區(qū)域細(xì)胞數(shù)目均較A 組多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 通過(guò)纖維蛋白凝膠接種較傳統(tǒng)方法接種可使hBMSCs 在支架中空間分布更均勻，能達(dá)到更快的細(xì)胞增殖和更有效的成骨分化。
目的 探討重組人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（recombinant humaninsulin-like growth factor 1，rhIGF-1）/珊瑚羥基磷灰石（coralline hydroxyapatite，CHA）/自體紅骨髓（autogeneous red bone marrow，ARBM）復(fù)合構(gòu)建重組人工骨修復(fù)骨缺損的能力。 方法 成年中國(guó)家兔54只，隨機(jī)分為3組，每組18只。制成雙側(cè)橈骨干11 mm骨-骨膜全層缺損模型，每組動(dòng)物雙側(cè)缺損分別隨機(jī)植入兩種不同材料，形成自體對(duì)照的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。1組：實(shí)驗(yàn)組（A組，植入CHA/ARBM/rhIGF-1）和對(duì)照組（B組，植入CHA/ARBM）；2組：實(shí)驗(yàn)組（C組，植入CHA/ rhIGF-1）和對(duì)照組（D組，植入CHA）；3組：實(shí)驗(yàn)組（E組，植入取自對(duì)側(cè)相應(yīng)缺損骨段的自體骨）和對(duì)照組（F組，缺損曠置）。于術(shù)后2、4、8和12周行X線片觀察、計(jì)算機(jī)圖像分析、組織學(xué)觀察和生物力學(xué)檢測(cè)，比較各組修復(fù)骨缺損能力。 結(jié)果 A組在各時(shí)間點(diǎn)X線片及計(jì)算機(jī)圖像分析均優(yōu)于其它各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）。組織學(xué)觀察A組12周時(shí)可形成均勻致密的板層骨，整個(gè)過(guò)程與自體骨移植后組織形態(tài)學(xué)變化基本相似。12周抗彎生物力學(xué)測(cè)試，A組和E組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），但顯著優(yōu)于其它各組（Plt;0.01）；C組和D組各時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），成骨效果低于A、B和E組。12周時(shí)F組缺損未修復(fù)。 結(jié)論 CHA/ARBM/rhIGF-1重組后可協(xié)同實(shí)現(xiàn)骨再生、骨傳導(dǎo)和骨誘導(dǎo)三重促成骨功效，可替代自體骨移植，成為一種新型的復(fù)合活性人工骨。
目的探討珊瑚多孔羥基磷灰石(CHAP)、纖維蛋白(FS)及金葡液(SAI)復(fù)合物修復(fù)骨缺損的作用,以及作為人工骨移植替代材料的可行性. 方法采用新西蘭大白兔54只在雙側(cè)橈骨制備骨缺損模型后分成實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白組.將CHAP-FS-SAI復(fù)合物植入骨缺損處作為實(shí)驗(yàn)組,自體骨植入作為對(duì)照組,空白組不植入任何物質(zhì);術(shù)后2、4、8和12周分別取2只兔行大體標(biāo)本觀察、組織學(xué)、X線片觀察及生物力學(xué)測(cè)試,比較各組修復(fù)骨缺損的能力. 結(jié)果實(shí)驗(yàn)組術(shù)后2周見(jiàn)植入物與骨端形成緊密的纖維性連接,鏡下可見(jiàn)CHAP周圍大量成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及毛細(xì)血管增生;對(duì)照組有少量骨痂形成,有軟骨細(xì)胞、骨母細(xì)胞及破骨細(xì)胞.4、8周兩組均見(jiàn)大量骨痂形成,鏡下見(jiàn)軟骨細(xì)胞鈣化,組織骨和板層骨.12周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均見(jiàn)大量成熟的骨細(xì)胞及板層骨;實(shí)驗(yàn)組見(jiàn)植入物完全骨化,塑形完全,CHAP未完全降解.空白組12周骨缺損區(qū)為纖維瘢痕組織填充,鏡下主要為大量成纖維細(xì)胞.X線片2周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有骨痂影,4周骨痂影增多.8周實(shí)驗(yàn)組骨缺損消失,CHAP分散在骨痂中;對(duì)照組骨折線消失,髓腔開(kāi)始形成.12周實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組骨皮質(zhì)連續(xù),髓腔復(fù)通,塑形完全.空白組12周骨缺損區(qū)無(wú)骨性連接.生物力學(xué)測(cè)試最大扭矩及抗扭剛度在術(shù)后4、8、12周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均無(wú)差異(P＞0.05),但術(shù)后2周,實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05). 結(jié)論 CHAP-FS-SAI復(fù)合物具有較強(qiáng)的成骨能力和良好的生物相容性,能作為自體骨移植的一種替代物修復(fù)骨缺損.
探討以珊瑚轉(zhuǎn)化羥基磷灰石(CHA ) 作為骨組織工程支架材料的可行性, 尋找最佳支架材料, 為組織工程研究開(kāi)辟新的途徑。方法 取4 周齡兔骨髓, 分離骨髓基質(zhì)細(xì)胞, 體外培養(yǎng), 誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,胰酶消化后離心收集細(xì)胞, 接種至高溫滅菌的CHA 材料, 無(wú)菌條件下植入8 只裸鼠皮下組織中。對(duì)照組為同體單純植入CHA。分別于6、8 周取材, 行大體觀察、X 線攝片及組織學(xué)染色, 觀察新骨形成情況。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組6 周時(shí)大體標(biāo)本淺紅色, X 線片有較高密度阻射影像, 組織學(xué)檢查可見(jiàn)有新骨形成; 8 周時(shí)大體標(biāo)本呈紅色, 質(zhì)硬, X 線阻射影像密度更高, 鏡下可見(jiàn)大量新骨形成并相互連接成骨小梁樣結(jié)構(gòu), 骨細(xì)胞位于陷窩中。對(duì)照組8 周大體標(biāo)本均為白色, 周圍軟組織包裹, X 線片僅見(jiàn)CHA 阻射影響, 組織學(xué)檢查無(wú)新骨形成, 為大量纖維組織長(zhǎng)入CHA 孔洞內(nèi)。結(jié)論 CHA 可作為骨組織工程的支架材料, 具有廣闊的應(yīng)用前景。
目的 彌補(bǔ)單純珊瑚無(wú)骨誘導(dǎo)活性、骨修復(fù)能力弱等缺陷，為臨床提供理想的骨移植替代材料。方法 將珊瑚與膠原和重組人骨形成蛋白２（ｒｈＢＭＰ２）復(fù)合，制備珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２復(fù)合人工骨，將其植入大鼠背部肌肉陷窩，以珊瑚／膠原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２復(fù)合人工骨植入作對(duì)照；取材后通過(guò)組織學(xué)方法和圖像分析評(píng)價(jià)其骨誘導(dǎo)活性。結(jié)果 珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２植入后１周，在局部誘導(dǎo)出軟骨細(xì)胞分化和軟骨基質(zhì)形成；植入后４周，形成含骨髓的板層骨；誘導(dǎo)成骨的量有明顯的ｒｈＢＭＰ２劑量依賴性（Ｐ＜０．０１）；而珊瑚／膠原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２植入?yún)^(qū)均無(wú)骨或軟骨形成。結(jié)論 珊瑚／膠原／ｒｈＢＭＰ２復(fù)合人工骨具有良好的異位誘導(dǎo)成骨活性，是一種較理想的骨移植替代材料。
為對(duì)國(guó)產(chǎn)濱珊瑚的骨修復(fù)作用作初步評(píng)估，將２０～４０目顆粒狀濱珊瑚植入兔顱骨直徑為１．５ｃｍ的缺損區(qū)，以羥基磷灰石、空白為對(duì)照，分別于術(shù)后第２，４，８及１２周取材，作組織學(xué)和組織形態(tài)測(cè)量學(xué)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，植入缺損區(qū)的珊瑚隨時(shí)間推移逐漸降解，同時(shí)新骨不斷長(zhǎng)入，至術(shù)后第１２周珊瑚完全降解，新骨修復(fù)達(dá)缺損中心區(qū)，新骨所占百分比為３６．９％，與對(duì)照組比較有顯著差異（Ｐ＜０．０１）。認(rèn)為，珊瑚人工骨具有良好的骨傳導(dǎo)作用，但降解速度過(guò)快，易導(dǎo)致骨修復(fù)不完全。
目的總結(jié)天然珊瑚充填治療小頦畸形的遠(yuǎn)期療效，探討天然珊瑚與新生骨間的體積關(guān)系及新生骨的穩(wěn)定性。 方法回顧分析1998年10月-2004年9月，采用頦部水平截骨結(jié)合天然珊瑚塊充填治療的12例小頦畸形患者臨床資料。男7例，女5例；年齡15～28歲，平均18.5歲。術(shù)前、術(shù)后即刻及末次隨訪時(shí)對(duì)患者面容及頭顱X線片進(jìn)行測(cè)量，分析下唇點(diǎn)至頦下點(diǎn)垂直距離、頦前點(diǎn)至鼻根點(diǎn)和下牙槽點(diǎn)連線的距離、下牙槽點(diǎn)至頦下點(diǎn)的垂直距離、頦部截骨間隙垂直距離，并計(jì)算各指標(biāo)復(fù)發(fā)率。 結(jié)果患者口內(nèi)切口均Ⅰ期愈合，無(wú)手術(shù)并發(fā)癥發(fā)生。患者均獲隨訪，隨訪時(shí)間8～12年，平均9.2年。頭顱X線片復(fù)查示，8年后珊瑚塊蜂窩狀結(jié)構(gòu)均完全消失，被骨組織替代。8年后取出鈦板時(shí)見(jiàn)頦部新生骨具有良好的強(qiáng)度和頦肌骨膜附著。末次隨訪時(shí)下唇點(diǎn)至頦下點(diǎn)垂直距離、下牙槽點(diǎn)至頦下點(diǎn)的垂直距離、頦部截骨間隙垂直距離均較術(shù)后即刻縮短，平均復(fù)發(fā)率分別為6.1%、22.9%、31.7%；而頦前點(diǎn)至鼻根點(diǎn)和下牙槽點(diǎn)連線的距離無(wú)明顯變化。9例患者對(duì)手術(shù)療效滿意；3例再次調(diào)整頦部形態(tài)邊緣。 結(jié)論天然珊瑚充填治療小頦畸形后，盡管存在部分體積丟失，但能獲得穩(wěn)定的新骨和滿意的遠(yuǎn)期療效。
目的 通過(guò)影像學(xué)表現(xiàn)評(píng)價(jià)硫酸葡聚糖/重組人 BMP-2/殼聚糖（dextran sulfate/recombinant human BMP-2/chitosan，DS/rhBMP-2/CS）緩釋微球聯(lián)合珊瑚羥基磷灰石（coral hydroxyapatite，CHA），修復(fù)大段骨缺損的成骨效果。 方法 取 57 只 24 周齡雄性新西蘭大白兔，制備右橈骨 20 mm 長(zhǎng)骨缺損模型。將其中 54 只兔隨機(jī)分為 3 組（n=18），A、B、C 組分別將 CHA、DS/rhBMP-2/CS/CHA 和 rhBMP-2/CHA 人工骨植入骨缺損區(qū)域中；余 3 只兔不植入材料作為空白對(duì)照組。術(shù)后觀察動(dòng)物大體情況；術(shù)后 4、8、12 周取材行 X 線片觀察，Micro-CT 掃描及三維重建獲取新生骨體積。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后恢復(fù)良好，大體情況正常。X 線片觀察示，B 組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)骨愈合情況均優(yōu)于 A、C 組；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn) B 組 X 線片評(píng)分顯著高于 A、C 組（P<0.05）；術(shù)后 8、12 周 C 組評(píng)分高于 A 組（P<0.05）。Micro-CT 掃描及三維重建觀察示，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn) A 組骨缺損區(qū)新生骨組織少，成骨形態(tài)差；B 組新生骨組織多，骨缺損區(qū)骨塑形良好，12 周時(shí)逐漸接近正常骨形態(tài)；C 組骨缺損區(qū)新生骨組織較多，成骨形態(tài)一般。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn) B 組新生骨體積均顯著高于 A、C 組（P<0.05），術(shù)后 8 周 C 組評(píng)分高于 A 組（P<0.05）。 結(jié)論 DS/rhBMP-2/CS/CHA 緩釋人工骨的成骨效果明顯優(yōu)于單純 CHA 和 rhBMP-2/CHA，為未來(lái)應(yīng)用骨組織工程方法臨床治療骨缺損提供了新思路。