建立人結(jié)腸癌細胞株SW480裸鼠移植瘤模型,觀察8肽生長抑素(SMS 201-995,SMS)對移植瘤的作用及機理。結(jié)果∶SMS組及SMS+PG(5肽胃泌素)組移植瘤的體積、重量、瘤細胞內(nèi)cAMP、DNA、蛋白質(zhì)含量、S期和G2M期細胞數(shù)及增殖指數(shù)均顯著低于PG組及對照組,PG組顯著高于對照組;而G0/G1期細胞數(shù)則顯著高于PG組及對照組,PG組顯著低于對照組。本實驗結(jié)果提示:生長抑素具有直接抑制人結(jié)腸癌細胞株SW480移植瘤生長的作用,又可抑制胃泌素對移植瘤的促增殖作用。這種作用機理是通過抑制瘤細胞內(nèi)cAMP、DNA和蛋白質(zhì)的合成,從而抑制瘤細胞從G0/G1期進入到S期和G2M期。這為大腸癌患者應(yīng)用生長抑素類似物進行內(nèi)分泌治療提供了實驗依據(jù)。
目的 通過復(fù)制人肝癌細胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,觀察綠茶提取物表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)干預(yù)對HepG2移植瘤新生血管生成的影響。 方法 瘤體接種復(fù)制HepG2移植瘤模型,荷瘤裸鼠20只隨機分組,實驗組給予EGCG溶液每日20 mg/(kg·只),腹腔注射3周,對照組給予等量滅菌注射用水3周,末次用藥24 h,后處死裸鼠,剝離移植瘤。常規(guī)病理切片觀察移植瘤組織結(jié)構(gòu);逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA及蛋白表達,并通過檢測CD34表達計數(shù)瘤組織微血管密度(MVD)。 結(jié)果 組織病理學(xué)觀察實驗組移植瘤見大量壞死區(qū),瘤體內(nèi)血管數(shù)量明顯少于對照組;實驗組HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表達水平比對照組均明顯下調(diào)(P<0.05),實驗組MVD比對照組明顯下降(P<0.05)。 結(jié)論 EGCG可抑制荷瘤裸鼠HepG2移植瘤新生血管生成。
目的 建立人胃癌羥喜樹堿(HCPT)耐藥細胞系SGC-7901/HCPT裸鼠皮下移植瘤模型并研究其生物學(xué)特征。方法 體外培養(yǎng)人胃癌細胞系SGC-7901和SGC-7901/HCPT,采用皮下注射方式分別接種至裸小鼠,待腫瘤長徑達1.0 cm時,將其切下剪成直徑為0.1~0.2 cm小塊,再接種至第2代裸鼠皮下進行傳代,重復(fù)至第4代。對第4代移植瘤光鏡下的組織學(xué)形態(tài)、電鏡下的超微結(jié)構(gòu)及生長特點進行觀察,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測其耐藥性。結(jié)果 裸鼠皮下移植瘤呈圓形或橢圓形,表面可見豐富的血管網(wǎng)。光鏡下見親代細胞移植瘤的細胞大小基本一致,排列較整齊,細胞核的大小較一致; 而耐藥細胞移植瘤的細胞形態(tài)較不規(guī)則,排列紊亂,細胞核的大小差異較大。電鏡下見親代細胞移植瘤細胞的細胞核無腫脹,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常; 耐藥細胞移植瘤細胞的細胞核略腫脹,核異染色質(zhì)凝集,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹較明顯。與親代細胞第4代移植瘤相比較,耐藥細胞第4代移植瘤對HCPT的耐藥指數(shù)為9.02±0.78,對阿霉素、絲裂霉素C、5-氟尿嘧啶及依托泊苷的耐藥指數(shù)分別為1.24±0.09、1.31±0.17、0.96±0.12和1.07±0.16。結(jié)論 本實驗建立了穩(wěn)定的人胃癌HCPT耐藥細胞系SGC-7901/HCPT裸鼠移植瘤模型,耐藥細胞對HCPT的耐藥性保持穩(wěn)定,且對其他化療藥物無交叉耐藥性,可用于下游實驗研究。
目的 探討5-氟尿嘧啶(5-FU)和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine, SZ)對裸鼠皮下移植瘤胰腺癌細胞BxPC-3凋亡基因的作用。方法 用RT-PCR和Western blot法分別檢測5-FU及SZ單獨或聯(lián)合作用后裸鼠皮下移植瘤凋亡相關(guān)基因NF-κB (p65)、bcl-2及cyclinD1 mRNA和蛋白表達水平以及Bax蛋白表達水平的變化。結(jié)果 5-FU (7.5和15 mg/kg)和SZ(10和20 mg/kg)單獨或聯(lián)合作用裸鼠皮下移植瘤,其NF-κB (p65) mRNA表達相對含量和蛋白表達水平與各自對照組比較,除SZ組2個亞組外,其余各組均明顯降低(P<0.01); bcl-2和cyclinD1 在mRNA和蛋白水平以及Bax蛋白表達量與各自對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01); 上述指標(biāo)經(jīng)多因素方差分析顯示二者間有明顯的交互作用。結(jié)論 Bax水平上調(diào), bcl-2、cyclinD1及NF-κB (p65)水平下調(diào)可能是SZ可協(xié)同增強5-FU誘導(dǎo)裸鼠皮下移植瘤胰腺癌細胞BxPC-3凋亡的機理之一。
目的研究中藥茯苓對SGC-7901胃癌細胞株裸鼠體內(nèi)移植瘤的影響。 方法①將10只裸鼠建立移植瘤模型后,隨機分為空白對照組和茯苓組,每組5只,分別給予生理鹽水和茯苓灌胃(0.5 mL),連續(xù)灌胃32 d。每間隔3 d計算移植瘤的體積,繪制移植瘤生長曲線。至第32天時處死裸鼠,稱取瘤體重量,計算抑瘤率;同時采用免疫組化染色方法檢測2組裸鼠移植瘤組織中B細胞淋巴瘤基因-2(B cell lymphoma 2, Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、 胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表達。②制備含茯苓血清。將SGC-7901胃癌細胞株分為2組,空白對照組加入含生理鹽水血清,茯苓組加入含茯苓血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)。分別于處理后24 h和48 h行Western-blot法檢測胃癌細胞中Bcl-2及Bax的表達。 結(jié)果第32天時,空白對照組〔(2 652.17±225.01)mm3和(2.48±0.21)g〕裸鼠的移植瘤體積和質(zhì)量均大于茯苓組〔(1 247.56±277.23)mm3和(1.28±0.28)g〕,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.050)。茯苓的抑瘤率為48.39%。免疫組化檢測結(jié)果顯示,茯苓組裸鼠移植瘤組織中Bcl-2〔(4.20±1.10)分和(8.00±1.20)分〕和VEGF〔(3.80±0.45)分和(7.80±1.10)分〕的表達均低于空白對照組(P<0.050),而Bax〔(7.40±1.34)分和(3.00±0.71)分〕、Caspase-3〔(6.60±1.34)分和(2.60±0.55)分〕及Caspase-9〔(7.20±1.79)分和(4.00±1.22)分〕的表達均高于空白對照組(P<0.050)。與空白對照組(1.72±0.03)比較,24 h(0.96±0.04)和48 h(0.77±0.04)時茯苓組Bcl-2的表達水平均較高(P<0.050),且茯苓組48 h時Bcl-2的表達水平高于24 h時(P<0.050);與空白對照組(0.15±0.01)比較,24 h時(0.19±0)茯苓組Bax的表達水平變化不明顯(P>0.050),但48 h時(0.55±0.01)Bax的表達水平高于空白對照組和24 h茯苓組(P<0.050)。 結(jié)論茯苓能夠抑制裸鼠移植瘤的生長,其機理可能與線粒體凋亡通路及抑制VEGF的表達有關(guān)。
目的研究羥基紅花黃色素A(HSYA)對小鼠Lewis肺癌移植瘤中微血管密度(MVD)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA表達的影響,探討HSYA抑制腫瘤的分子機制。 方法運用C57/BL小鼠接種Lewis肺癌細胞株于右側(cè)肋腹皮下建立小鼠肺癌移植瘤模型,隨機分為對照組(生理鹽水)、環(huán)磷酰胺組(CTX)、HSYA不同劑量組(28 mg/L、56 mg/L、112 mg/L),給藥方式均為腹腔注射給藥。用藥22 d后脫頸處死小鼠并剝離腫瘤組織,采用免疫組織化學(xué)法檢測MVD,采用實時熒光定量PCR檢測各組腫瘤組織中VEGF mRNA的表達情況。 結(jié)果56 mg/L、28 mg/L HSYA組與CTX組小鼠腫瘤組織MVD分別為30.01±3.12、22.56±2.11、16.21±2.40,顯著低于對照組的41.10±2.93以及112 mg/L HSYA組的37.66±3.04,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.82,P=0.010;χ2=3.16,P=0.007;χ2=4.58,P=0.000)及(χ2=1.98,P=0.038;χ2=2.45,P=0.016;χ2=3.82,P=0.001)。28 mg/L HSYA組與對照組VEGF擴增熒光表達閾值所需循環(huán)次數(shù)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但其VEGF mRNA的表達值僅為0.43±0.16,明顯低于對照組的0.82±0.06,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.77,P=0.038)。 結(jié)論28 mg/L HSYA能夠使小鼠Lewis肺癌移植中MVD明顯減少,具有抑制腫瘤生長的作用,可能與下調(diào)VEGF mRNA表達有關(guān)。
目的 觀察 DDX46 基因沉默后食管鱗癌 Eca-109 細胞裸鼠皮下移植瘤的生長變化,在活體動物模型中進一步研究 DDX46 在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法 4 周齡健康雌性 BALB/c 裸鼠 25只隨機分為 3 組。應(yīng)用 RNA 干擾技術(shù)通過慢病毒載體構(gòu)建獲得 DDX46 基因沉默的慢病毒顆粒(實驗組:DDX46-shRNA-LV,n=10)及空載體慢病毒顆粒(對照組:Control-LV,n=10),分別感染食管鱗癌 Eca-109 細胞株,每只 4×106個細胞量注射至 BALB/c 裸鼠右腋皮下;以人永生化食管鱗狀上皮細胞 Het-1A 為空白對照組(n=5),每側(cè) 4×106 個細胞量分別注射至 BALB/c 裸鼠雙側(cè)腋皮下。檢測各組移植瘤生長情況,活體成像儀觀察各組熒光表達量。Western blotting 檢測 DDX46 基因沉默后移植瘤組織凋亡信號通路關(guān)鍵分子表達的變化。 結(jié)果 與對照組相比,沉默 DDX46 基因使裸鼠移植瘤體積減小、重量減輕,生長減緩(P<0.001);小動物活體成像顯示 DDX46-shRNA-LV 組熒光區(qū)總熒光表達量和平均熒光表達量均明顯低于 Control-LV 組(P<0.001);Het-1A 細胞接種裸鼠不成瘤。Western blotting 檢測顯示,與對照組比較,沉默 DDX46 基因使移植瘤 DDX46 蛋白表達水平顯著下降(P<0.01),而 cleaved Caspase-3 和 cleaved PARP-1 蛋白表達水平顯著上升(P<0.01)。 結(jié)論 沉默 DDX46 基因可顯著抑制裸鼠移植瘤的生長,其機制可能是通過激活細胞凋亡信號通路而發(fā)揮抑瘤作用。
目的優(yōu)化人原代胰腺導(dǎo)管癌(PDAC)細胞及腫瘤相關(guān)成纖維細胞(CAFs)的分離及培養(yǎng)方法,驗證 CAFs 對原代 PDAC 細胞的體外生長以及其對高度免疫缺陷模型 NOG 小鼠體內(nèi)成瘤的影響,以探索人源性異種移植瘤(PDX)模型構(gòu)建的新方法。方法首先原代培養(yǎng)手術(shù)切除的 PDAC 組織。以原代 PDAC 細胞單獨培養(yǎng)為對照,觀察 CAFs 和原代 PDAC 細胞共培養(yǎng)對 PDAC 細胞傳代生長活性的影響。最后在 NOG 小鼠肩胛部注射混合培養(yǎng)的原代 PDAC 細胞和 CAFs,觀察 PDX 模型建模情況。結(jié)果原代 PDAC 細胞在體外單獨培養(yǎng)傳代少,均在 5 代及以內(nèi)停止生長;與 CAFs 共培養(yǎng)可促進原代 PDAC 細胞生長活性,可穩(wěn)定傳至 10 代以上。NOG 小鼠體內(nèi)注射混合細胞(原代 PDAC 細胞+CAFs)建模 2~3 周即可形成腫瘤,而注射 CAFs 無腫瘤形成?;旌霞毎ńS?13 例(92.9%)成瘤,單一細胞法有 9 例(64.3%)成瘤,可能因為樣本量少,二者成瘤率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.167);并且腫瘤細胞注射后 2、4、6、8 周時混合細胞法建模的腫瘤體積均明顯大于對應(yīng)觀察時間點單一細胞法建模的腫瘤體積(P<0.01)。結(jié)論CAFs 對原代 PDAC 細胞生長傳代具有促進作用,原代 PDAC 細胞與 CAFs 共培養(yǎng)法可顯著提高 PDAC 原代培養(yǎng)穩(wěn)定傳代,原代 PDAC 細胞與 CAFs 混合培養(yǎng)的細胞注射可提高 NOG 小鼠 PDX 建模成功率。
目的探討 shRNA 靶向沉默接觸蛋白-1(CNTN1)基因表達對人乳腺癌細胞株 MDA-MB-468 裸鼠皮下移植瘤生長的抑制作用。方法18 只 4 周齡雄性 BALB/c 裸鼠隨機均分為 3 組,收集處于對數(shù)生長期的 MDA-MB-468 細胞(空白對照組)、轉(zhuǎn)染無義 shRNA 片段的 MDA-MB-468 細胞(空載體組)及轉(zhuǎn)染 shRNA 載體片段的 MDA-MB-468 細胞(沉默組)分別于每組裸鼠后背部皮下注射制備裸鼠皮下移植瘤模型,觀察沉默 CNTN1 基因?qū)?MDA-MB-468 細胞移植瘤生長的影響以及采用免疫組織化學(xué)方法檢測移植瘤中 CNTN1 與 Ki-67 蛋白的表達情況。結(jié)果各組裸鼠皮下接種腫瘤細胞后均成功致瘤,成瘤率為 100%。每 3 d測量種植瘤體積發(fā)現(xiàn)沉默組種植瘤生長速度顯著低于空白對照組(P<0.05)和空載體組(P<0.05),至第 18 天處死裸鼠獲取腫瘤,發(fā)現(xiàn)沉默組種植瘤的體積及質(zhì)量均顯著小或低于空白對照組(P<0.05)和空載體組(P<0.05);沉默組種植瘤中 CNTN1 和 Ki-67 蛋白表達陽性率均明顯低于空白對照組(P<0.05)和空載體組(P<0.05)。結(jié)論沉默 CNTN1 基因表達可以抑制人乳腺癌細胞株 MDA-MB-468 細胞裸鼠移植瘤的生長。