華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 作者 包含"程潭" 3條結(jié)果
  • 阿侖膦酸鈉對IL-1β 體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究

    目的 二膦酸鹽類藥物可抑制骨重塑,通過觀察阿侖膦酸鈉(alendronate,ALN)對IL-1β 體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的影響,探討ALN 治療骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)的可行性。 方法 取15 只1 月齡SPF 級SD 大鼠(雌雄不限,體重100 ~ 150 g)膝關(guān)節(jié)軟骨,體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞并傳至第3 代。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行鑒定。將第3 代軟骨細(xì)胞分為3 組:空白對照組(A 組)軟骨細(xì)胞用常規(guī)DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)5 d;IL-1β 誘導(dǎo)組(B 組)軟骨細(xì)胞以10 ng/mL 重組人IL-1β 培養(yǎng)2 d 后更換為常規(guī)DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)3 d;IL-1β 誘導(dǎo)后加ALN 培養(yǎng)組(C 組)軟骨細(xì)胞以10 ng/mL 重組人IL-1β 培養(yǎng)2 d 后更換為濃度為1 × 10-6mol/L 的ALN 培養(yǎng)3 d。培養(yǎng)后取各組細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色及實(shí)時PCR 檢測,觀察細(xì)胞中Ⅱ型膠原(collagen type Ⅱ,Col Ⅱ)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)和β- 連環(huán)蛋白(β-catenin)的表達(dá)水平。 結(jié)果 甲苯胺藍(lán)染色示培養(yǎng)的細(xì)胞呈異染性,證實(shí)為軟骨細(xì)胞。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示:A、B、C 組Col Ⅱ表達(dá)積分吸光度(IA)值分別為15.377 0 ± 0.571 8、5.463 2 ± 0.450 4、10.290 7 ± 0.499 2,C 組高于B 組,但低于A 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);MMP-13 表達(dá)IA 值分別為2.777 5 ± 0.199 6、6.998 1 ± 0.329 7、3.068 6 ± 0.205 6,C 組明顯低于B 組(P lt; 0.05),但與A 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);β-catenin 表達(dá)IA 值分別為4.390 3 ± 0.551 9、11.799 9 ± 0.348 7、6.611 7 ± 0.381 8,C 組低于B 組,但高于A 組, 差 異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。實(shí)時PCR 檢測示,C 組Col Ⅱ mRNA 表達(dá)高于B 組,MMP-13 及β-catenin 的mRNA 表達(dá)低于B 組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);Col Ⅱ和β-catenin mRNA 表達(dá)高于A 組,MMP-13 mRNA表達(dá)低于A 組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 ALN 可能通過抑制IL-1β 誘導(dǎo)的大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Col Ⅱ的降解并下調(diào)MMP-13 及 β-catenin 因子的表達(dá),對軟骨細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。

    發(fā)表時間:2016-08-31 05:41 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 仙靈骨葆對卵巢切除大鼠股骨骨折愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究

    研究仙靈骨葆對卵巢切除大鼠股骨骨折愈合的作用。 方法 健康12 周齡雌性SD 大鼠40 只,體重(258 ± 14)g,隨機(jī)分為4 組,每組10 只。A 組僅作切口暴露腹腔;B 組僅切除卵巢;C、D 組切除卵巢同時制備右側(cè)股骨中段橫型骨折,髓內(nèi)針固定,術(shù)后分別采用生理鹽水及250 mg/(kg·d)仙靈骨葆灌胃。于術(shù)后即刻、1、2、3、4 及5 周測量A、B 組大鼠體重。術(shù)后5 周取各組右側(cè)股骨標(biāo)本,雙能 X 線骨密度儀測量股骨全長骨密度(total femur bone mineral density,tBMD)、遠(yuǎn)1/3 段骨密度(distal femur bone mineral density,dBMD)和中1/3 段骨密度(middle femur bone mineral density,mBMD),并行C、D 組CR 攝片、HE 染色和免疫組織化學(xué)染色。 結(jié)果 B 組大鼠體重從第3 周開始顯著高于A組(P lt; 0.05),絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型制備成功。CR攝片示D組骨痂量相對較多,骨折線模糊;C組骨痂量較少,骨折線清晰。B 組tBMD 和dBMD 明顯低于A 組,D 組mBMD 明顯高于C 組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);D 組tBMD 和dBMD較C 組有增高趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。組織學(xué)觀察D 組與C 組比較,骨折端大部分骨性愈合,骨髓腔可見較多毛細(xì)血管植入。免疫組織化學(xué)染色示C、D組BMP-2 的積分吸光度(IA)值分別為2.236 6 ± 0.181 8 和3.727 3 ± 0.874 2,VEGF 的IA 值分別為2.835 5 ± 0.537 0 和3.839 6 ± 0.223 0,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 仙靈骨葆可促進(jìn)卵巢切除大鼠股骨骨折愈合,加快編織骨向板層骨的轉(zhuǎn)化,這可能與上調(diào)BMP-2 和VEGF 表達(dá)相關(guān)。

    發(fā)表時間:2016-09-01 09:07 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
  • 阿侖膦酸鈉體外對軟骨細(xì)胞的影響及對兔前交叉韌帶切斷后關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的作用

    目的 探討阿侖膦酸鈉(alendronate,ALN)對受IL-1β 干預(yù)后軟骨細(xì)胞的影響,以及對前交叉韌帶切斷術(shù)(anterior cruciate ligament transection,ACLT)后兔骨性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的保護(hù)作用。 方法 取3 月齡雄性日本大耳白兔關(guān)節(jié)軟骨采用酶消化法分離軟骨細(xì)胞,并進(jìn)行體外培養(yǎng)。取第3 代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為3 組:ALN組(A1 組)及IL-1β 組(B1 組),采用含10 ng/mL 人重組IL-1β 的DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)2 d 后,分別更換含或不含1 ×10-6 mol/L ALN 的DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)3 d;空白組(C1 組)細(xì)胞以DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)5 d。取各組細(xì)胞行Col Ⅱ及MMP-13 免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察及實(shí)時RT-PCR 檢測。另取24 只3 月齡雄性日本大耳白兔,隨機(jī)分為3 組(n=8)。ACLT + ALN 組(A2 組)及ACLT 組(B2 組)制備ACLT 模型,假手術(shù)組(C2 組)以同法顯露前交叉韌帶后縫合切口。術(shù)后4 d A2 組以10 μg/(kg·d)皮下注射濃度為25 μg/mL 的ALN,B2 組和C2 組予等量生理鹽水。8 周后處死動物行膝關(guān)節(jié)大體觀察,取股骨內(nèi)側(cè)髁行組織學(xué)觀察及Col Ⅱ及MMP-13 免疫組織化學(xué)染色觀察,對脛骨進(jìn)行軟骨下骨組織形態(tài)學(xué)分析。 結(jié)果 C1 組軟骨細(xì)胞胞漿中見Col Ⅱ免疫細(xì)胞化學(xué)染色表達(dá)呈強(qiáng)陽性,A1 組呈陽性表達(dá),B1 組少見陽性顯色。A1 組積分吸光度(IA)值高于B1 組(P lt; 0.05),與C1 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)(P gt; 0.05)。C1 組軟骨細(xì)胞胞漿中未見MMP-13免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性表達(dá),A1 組呈陽性表達(dá),B1 組呈強(qiáng)陽性表達(dá)。A1 組IA 值低于B1 組(P lt; 0.05),但高于C1 組(P lt; 0.05)。實(shí)時RT-PCR 檢測示A1 組Col Ⅱ mRNA 表達(dá)高于B1 組(P lt; 0.05),與C1 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05);MMP-13 mRNA 表達(dá)低于B1 組(P lt; 0.05),但高于C1 組(P lt; 0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)8 周后C2 組膝關(guān)節(jié)面無潰瘍,A2 組膝關(guān)節(jié)面有少量潰瘍,B2 組關(guān)節(jié)面潰瘍較多并有全層潰瘍。A2 組Mankin 評分低于B2 組(P lt; 0.05),但高于C2 組(P lt; 0.05)。免疫組織化學(xué)染色見C2 組關(guān)節(jié)軟骨中Col Ⅱ蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽性,A2 組呈陽性表達(dá),B2 組少見陽性顯色;A2 組IA 值高于B2 組(P lt; 0.05),與C2 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。C2 組關(guān)節(jié)軟骨中未見MMP-13 陽性表達(dá),A2 組呈弱陽性表達(dá),B2 組呈強(qiáng)陽性表達(dá);A2 組IA 值低于B2 組(P lt; 0.05),但高于C2 組(P lt; 0.05)。骨形態(tài)計(jì)量學(xué)結(jié)果示:B2 組軟骨下骨骨小梁體積比、骨小梁厚度低于A2、C2 組(P lt; 0.05),骨小梁分離度、熒光百分率和骨形成率高于A2、C2 組(P lt; 0.05)。以上指數(shù)A2 組與C2 組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。各組間骨小梁數(shù)目、礦化沉積率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 ALN 能抑制ACLT 兔關(guān)節(jié)軟骨降解,保護(hù)軟骨下骨骨量和微觀結(jié)構(gòu)。在體內(nèi)、體外ALN 均能抑制MMP-13 在軟骨細(xì)胞中的表達(dá),具有一定的軟骨細(xì)胞保護(hù)功能。

    發(fā)表時間:2016-09-01 09:08 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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