觀察TGF-β1 中和抗體對TGF-β 誘導的肌腱細胞膠原產生及術后粘連形成的影響，探討生物學調節(jié)在肌腱粘連防治中的作用。 方法 取6 只成年新西蘭大白兔12 條屈趾肌腱分離肌腱成纖維細胞、腱外膜細胞和腱內膜細胞，將細胞隨機分成2 組，實驗組加入1 ng/mL TGF-β 后，再加入不同濃度TGF-β1 中和抗體，對照組不添加任何試劑，培養(yǎng)3 d 后ELISA 測定Col Ⅰ的產生。取84 只兔行中趾屈趾肌腱切斷吻合術，隨機分成3 組，腱鞘內分別注入生理鹽水（NS 組,n=36）、1.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（1.0 μg/mL TGF-β1 組，n=36）和2.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（2.0 μg/mLTGF-β1 組，n=12）。術后4、8 周取出肌腱行肌腱粘連檢測、生物力學測定、組織學觀察和掃描電鏡觀察。1、2、4、8 周后取出NS 組及1.0 μg/mL TGF-β1 組肌腱，原位雜交方法測定TGF-β1 和Col Ⅰ mRNA 的表達。 結果 ELISA 檢測顯示，TGF-β1 能明顯提高肌腱細胞Col Ⅰ的產生；TGF-β1 抗體能降低肌腱成纖維細胞、腱外膜細胞和腱內膜細胞Col Ⅰ的產生，且呈劑量依賴關系。術后4、8 周，NS 組屈趾肌腱滑動距離較短，模擬主動屈曲度明顯受限，與1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/ mL TGF-β1 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；最大抗斷裂載荷各組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡和組織學觀察結果顯示，術后4、8 周NS 組膠原纖維排列紊亂，1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/mL TGF-β1 組膠原纖維排列整齊。原位雜交結果顯示，術后各時間點1.0 μg/mL TGF-β1 組TGF-β1 mRNA和Col ⅠmRNA表達水平均低于NS組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 TGF-β1 中和抗體能有效抑制TGF-β1 在肌腱損傷修復中的作用，減少粘連形成。
目的 對乳豬竇房結所在部位進行準確定位，建立一套可靠的竇房結細胞取材、分離、純化培養(yǎng)技術；觀察竇房結細胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內新生純種長白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實驗動物采用多導電生理記錄儀標記房波最早出現(xiàn)的部位，在該位置取材行原代竇房結細胞培養(yǎng)，分別采用常規(guī)方法培養(yǎng)和差速貼壁分離技術、5-BrdU 處理純化培養(yǎng)；于左心房部位取材行心房肌細胞純化培養(yǎng)作為對照。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、細胞貼壁時間、單細胞出現(xiàn)搏動時間、搏動頻率等。將純化培養(yǎng)的竇房結細胞以5 × 105 個/mL 密度接種至經預濕處理的Col Ⅰ纖維支架復合培養(yǎng)5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結果 房波最早出現(xiàn)的位置即為竇房結所在部位。純化培養(yǎng)的竇房結細胞有3 種形態(tài)，即梭形、三角形與不規(guī)則形，其中梭形細胞最多；心房肌細胞主要為三角形及不規(guī)則形，而無梭形細胞。竇房結細胞純化培養(yǎng)與常規(guī)培養(yǎng)比較，梭形細胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；不規(guī)則形細胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；三角形細胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。竇房結細胞復合Col Ⅰ纖維支架培養(yǎng)5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細胞；掃描電鏡見細胞成團吸附于支架表面及孔隙側壁，并可見細胞間通過突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結論 通過準確竇房結定位，采用差速貼壁結合5-BrdU 處理的純化培養(yǎng)可明顯提高乳豬竇房結梭形細胞比例，是一種可靠的竇房結細胞純化培養(yǎng)技術。竇房結細胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細胞相容性。