目的 檢測鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原發(fā)性肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)，比較兩者之間的差異，并探討其與肝細(xì)胞癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。方法 收集2009年2月至2010年8月期間于華西醫(yī)院肝臟及血管外科行手術(shù)切除的32例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的肝癌組織標(biāo)本及對應(yīng)的癌旁組織26例，行免疫組織化學(xué)染色，同時收集患者完整的臨床病理學(xué)資料。結(jié)果 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)陽性率分別為87.5%（28/32）、81.3%（26/32）及65.6%（21/32），高于癌旁組織中的61.5%（16/26）、34.6%（9/26）及30.8%（8/26），P＜0.05。鋅指蛋白A20的表達(dá)與乙肝表面抗原（HbsAg）表達(dá)情況及肝硬變情況有關(guān)（P＜0.05）；NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表達(dá)均與HbsAg表達(dá)情況有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中均呈高表達(dá)，而在癌旁組織中呈低表達(dá)；3種蛋白可能對肝臟腫瘤的良惡性判斷起指導(dǎo)作用。
目的 在人工全髖關(guān)節(jié)翻修術(shù)中發(fā)現(xiàn)假體周圍大量金屬離子聚集和NF-κB 受體活化因子配體（re ceptor activator of NF-κB ligand，RANKL）表達(dá)的增加，通過觀察Co2+、Cr3+ 對小鼠成骨細(xì)胞RANKL、骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）表達(dá)的影響，探討金屬離子與假體無菌性松動關(guān)系。 方法 取濃度為1 × 105 個 /mL 體外培養(yǎng)的小鼠成骨細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)基不同分兩組：實驗組采用含10 mg/L CoCl2 及150 mg/L CrCl3 溶液的培養(yǎng)基；對照組采用不含金屬離子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)24、48 h，采用RT-PCR 和ELISA 法檢測RANKL、OPG mRNA 及蛋白表達(dá)。 結(jié) 果 RT-PCR 檢測示培養(yǎng)24、48 h 兩組均見RANKL、OPG mRNA 的表達(dá)，實驗組表達(dá)量較對照組高，以RANKL 增加顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；培養(yǎng)24、48 h，實驗組RANKL/OPG mRNA 的比值分別為0.860、1.232，較對照組0.695、0.688 明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。ELISA 檢測顯示，實驗組RANKL、OPG 蛋白表達(dá)量較對照組明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+ 可刺激小鼠成骨細(xì)胞RANKL、OPG mRNA 的表達(dá)并促進(jìn)其蛋白的分泌，以RANKL 增加顯著，從而促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成與活化以及假體無菌性松動的發(fā)生。
目的 探討甘草酸二銨（diammonium glycyrrhizinate，DG）對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后NF-κB 的表達(dá)及神經(jīng)元凋亡的影響。 方法 取健康雄性SD 大鼠48 只，體重220 ～ 270 g，隨機(jī)分為實驗組和對照組，每組24 只。實驗組于缺血開始前10 min 舌下靜脈注射DG（20 mg/kg），對照組注射等量生理鹽水。夾閉左右腎動脈之間腹主動脈制備脊髓缺血再灌注損傷模型。兩組于缺血再灌注3、24、72、168 h 取腰段脊髓組織，切片，行HE 染色、免疫組織化學(xué)染色觀察及TUNEL 法凋亡細(xì)胞檢測，并進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 HE 染色示對照組缺血再灌注3 h 時，可見脊髓組織水腫，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)基本正常；24 h 和72 h 時組織病理改變進(jìn)一步加重；168 h 時灰質(zhì)前角中大量空泡形成，尚殘存多個結(jié)構(gòu)清楚的運動神經(jīng)元。實驗組各時間點明顯好于對照組。免疫組織化學(xué)染色示兩組缺血再灌注3 h 表達(dá)NF-κB p65 增強，24 h 達(dá)高峰，隨后緩慢下降。實驗組缺血再灌注各時間點吸光度（A）值分別為0.306 0 ± 0.024 4、0.396 4 ± 0.022 7、0.296 6 ±0.021 1 和0.267 9 ± 0.015 3；對照組分別為0.361 1 ± 0.017 7、 0.496 6 ± 0.020 1、 0.356 3 ± 0.021 0 和0.301 4 ± 0.018 1（P lt; 0.05）。DG 對各時間點NF-κB p65 表達(dá)的抑制率分別是15.40%、20.17%、19.28% 和11.11%。細(xì)胞凋亡檢測示兩組于缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡表達(dá)增強。實驗組各時間點A 值分別為0.171 0 ± 0.029 1、0.175 5 ± 0.031 1、0.175 1 ± 0.027 9和0.183 2 ± 0.023 7；對照組分別為0.236 8 ± 0.063 6、0.241 2 ± 0.042 6、0.201 5 ± 0.049 8 和0.250 1 ± 0.048 4（P lt; 0.05）。DG 各時間點對神經(jīng)元凋亡表達(dá)的抑制率分別為27.79%、27.23%、13.08% 和26.74%。實驗組和對照組NF-κB 表達(dá)和神經(jīng)元凋亡表達(dá)成正相關(guān)（r = 0.838，P lt; 0.01）。 結(jié)論 脊髓缺血再灌注可導(dǎo)致NF-κB 表達(dá)及凋亡神經(jīng)元增多，DG 可抑制脊髓神經(jīng)元NF-κB 的表達(dá)，減少神經(jīng)元凋亡。
目的 探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子 (b FGF)對人血管內(nèi)皮細(xì)胞 (EC)增生的影響及其機(jī)制 ,明確 b FGF對煙曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影響?！》椒ā∨囵B(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HU VEC) ,采用 MTT法測定 EC生長活性 ,免疫組織化學(xué)方法檢測 EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表達(dá)?！〗Y(jié)果 b FGF有顯著促進(jìn) EC增生的作用 ,可使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達(dá)增強 ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達(dá)減少 ;b FGF逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應(yīng)?！〗Y(jié)論 b FGF能促進(jìn) EC增生 ,其機(jī)制可能是通過激活 NF- κB,使細(xì)胞由靜止期進(jìn)入增殖期 ,促進(jìn) DNA合成 ,細(xì)胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b FGF可逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應(yīng)
目的研究雷公藤紅素對人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721增殖及凋亡的影響，并初步探討其可能的作用機(jī)理。 方法體外培養(yǎng)SMMC-7721細(xì)胞，細(xì)胞接受雷公藤紅素處理后，采用CCK-8實驗及Annexin V-FITC/PI雙染實驗觀察其對SMMC-7721細(xì)胞增殖及凋亡的影響；采用Caspase-3活性檢測試劑盒測定Caspase-3活性及Western blot法檢測SMMC-7721細(xì)胞中NF-κB蛋白的表達(dá)；同時用人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721進(jìn)行裸鼠成瘤實驗，觀察雷公藤紅素對裸鼠成瘤的影響。 結(jié)果雷公藤紅素可以抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖并呈濃度和時間依賴性；Annexin V-FITC/PI雙染實驗顯示隨著藥物濃度的增加，出現(xiàn)凋亡的細(xì)胞明顯增加；Caspase-3活性測定實驗顯示細(xì)胞接受雷公藤紅素處理后，Caspase-3活性明顯增強；Western blot實驗顯示SMMC-7721細(xì)胞接受雷公藤紅素處理后，細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)下調(diào)，并呈現(xiàn)一定的時間依賴性。裸鼠成瘤實驗顯示，雷公藤紅素可以抑制裸鼠種植瘤的生長。 結(jié)論雷公藤紅素能顯著抑制SMMC-7721增殖并誘導(dǎo)其凋亡，并可以抑制裸鼠種植瘤的生長。雷公藤紅素可能通過激活Caspase-3通路及抑制NF-κB通路誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡。
目的觀察姜黃素對高糖誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（RRVEC）凋亡的影響。方法取對數(shù)生長期原代培養(yǎng)的第4代RRVEC進(jìn)行實驗，采用免疫熒光染色法鑒定培養(yǎng)的細(xì)胞，并對內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志物血管性假性血友病因子（vWF）的表達(dá)進(jìn)行檢測。將培養(yǎng)的RRVEC分為對照組、高糖組和姜黃素干預(yù)組。對照組細(xì)胞正常培養(yǎng)。高糖組細(xì)胞經(jīng)30 mmol/L的葡萄糖培養(yǎng)。姜黃素干預(yù)組細(xì)胞經(jīng)30 mmol/L的葡萄糖培養(yǎng)24 h后，再加入30 μmol/L姜黃素處理24 h。采用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）相對含量及細(xì)胞凋亡的變化情況。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測各組細(xì)胞中核因子（NF）-κB p65的蛋白表達(dá)。采用蛋白免疫印跡法檢測各組細(xì)胞中B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)x蛋白（Bax）的蛋白表達(dá)。結(jié)果分離得到的RRVEC在1周后呈鋪路石樣單層貼壁生長。培養(yǎng)獲得的細(xì)胞vWF表達(dá)呈強陽性。對照組、高糖組及姜黃素干預(yù)組RRVEC中ROS相對含量、細(xì)胞凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=40.957、325.137，P=0.000、0.000）。與對照組比較，高糖組RRVEC中ROS相對含量、細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.677、25.500， P=0.000、0.000）。與高糖組比較，姜黃素干預(yù)組RRVEC中ROS相對含量、細(xì)胞凋亡率明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.568、12.818，P=0.000、0.000）。與對照組比較，高糖組RRVEC中NF-κB p65（t=8.322，P=0.000）、Bax（t=3.813，P=0.009）蛋白表達(dá)明顯增加，Bcl-2蛋白表達(dá)（t=4.362，P=0.005）及Bcl-2/Bax比值（t=6.449，P=0.001）明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與高糖組比較，姜黃素干預(yù)組RRVEC中NF-κB p65、Bax（t= 2.577、3.059，P=0.042、0.022）蛋白表達(dá)明顯降低，Bcl-2/Bax比值（t=3.831，P=0.009）明顯提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論姜黃素能抑制高糖誘導(dǎo)的RRVEC凋亡，其機(jī)制可能與增強Bcl-2表達(dá)、下調(diào)Bax表達(dá)從而抑制NF-κB信號通路有關(guān)。
目的分析核因子 NF-κB（NF-κB）p65 和自噬相關(guān)蛋白 Beclin1 及 p62 在甲腺乳頭狀癌（PTC）中的表達(dá)及其臨床意義。方法收集 2013 年 3 月至 2015 年 2 月期間筆者所在醫(yī)院收治的 160 例經(jīng)病理學(xué)檢查證實為 PTC 患者的腫瘤組織標(biāo)本及其癌旁組織標(biāo)本，同時收集上述患者中伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織標(biāo)本 90 例。采用免疫組化方法檢測 PTC 組織、癌旁組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中 NF-κBp65、Beclin1 及 p62 的表達(dá)情況，分析上述指標(biāo)與 PTC 患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果NF-κBp65 和 p62 在 PTC 組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)陽性率均高于癌旁組織（P<0.05），而 Beclin1 在 PTC 組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)陽性率均低于癌旁組織（P<0.05）。PTC 組織中 NF-κBp65 的表達(dá)與患者的臨床病理特征均無關(guān)（P>0.05）；p62 的表達(dá)隨腫瘤分化程度升高而降低（P<0.05）；Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的 Beclin1 表達(dá)分別低于Ⅰ+Ⅱ期和無淋巴轉(zhuǎn)移者（P<0.05），而 p62 的表達(dá)與之相反。Spearman 相關(guān)分析顯示，PTC 組織中，Beclin1 和 p62 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=–0.656，P<0.01），在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中，Beclin1 和 p62 的表達(dá)也呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=–0.562，P<0.01）。PTC 組織中 p62 及 NF-κBp65 表達(dá)陽性者 3 年生存率均低于表達(dá)陰性者（P<0.05），Beclin1 表達(dá)陽性者 3 年生存率則高于表達(dá)陰性者（P<0.05）。TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NF-κBp65 及 p62 為 PTC 預(yù)后的獨立危險因素，而 Beclin1 為保護(hù)因素。結(jié)論NF-κBp65 和 p62 在 PTC 組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中呈高表達(dá)，而 Beclin1 呈低表達(dá)，三者可作為 PTC 患者預(yù)后獨立預(yù)測因素；Beclin1 及 p62 與 PTC 生物學(xué)行為有關(guān)，可能成為 PTC 診斷的潛在指標(biāo)。
目的 探討藏、漢族阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）患者的血液流變學(xué)指標(biāo)與外周血單個核細(xì)胞中低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）/低氧誘導(dǎo)因子2α（hypoxia-inducible factor-2α，HIF-2α）表達(dá)的差異性。方法 選取藏、漢族OSAHS的重度患者各30例，同時選取同時期的健康體檢者藏、漢族各30例。采用全血黏度儀檢測各組受試者的全血黏度高剪切率、全血黏度低剪切率、血漿黏度比、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和紅細(xì)胞比容。用實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白免疫印跡分別檢測外周血單個核細(xì)胞中磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine kinase，AKT）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65 、HIF-1α和HIF-2α的mRNA和蛋白水平。結(jié)果 藏族OSAHS患者的血液流變學(xué)指標(biāo)水平均顯著高于藏族健康人和漢族OSAHS患者（均P<0.05），漢族OSAHS患者的血液流變學(xué)指標(biāo)水平均顯著高于漢族健康人（均P<0.05）。藏族OSAHS患者外周血單個核細(xì)胞的PI3K、AKT、NF-κB p65和HIF-1α mRNA和蛋白水平水平均顯著高于藏族健康人和漢族OSAHS患者（均P<0.05），漢族OSAHS患者HIF-1α mRNA和蛋白水平水平均顯著高于漢族健康人（均P<0.05），而HIF-2α mRNA和蛋白水平均顯著低于漢族健康人（均P<0.05）。結(jié)論 OSAHS患者的外周血單個核細(xì)胞HIF-1α水平上調(diào)和HIF-2α水平下調(diào)依賴于PI3K/AKT/NF-κB p65信號通路的激活，且藏族OSAHS患者的血液流變學(xué)水平高于漢族OSAHS患者。
目的 研究納美芬缺血后處理減輕肺缺血–再灌注損傷的作用機(jī)制，探討全病程中的最佳藥物治療時機(jī)。方法 將60只大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、模型組，以及納美芬A、B、C、D組共6組，每組10只。假手術(shù)組大鼠不行缺血再灌注處理，未予藥物治療。模型組采用阻斷左肺門法建立肺缺血–再灌注模型，未予藥物治療。缺血處理后納美芬A、B、C、D組分別于肺循環(huán)再灌注前5 min、再灌注后10、30、60 min時予尾靜脈注射納美芬（15 μg/kg）。全部大鼠于再灌注3 h末處死后留取左肺上葉組織，評估各組大鼠肺組織損傷程度，檢測肺組織濕/干重比值、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、Toll樣受體2（Toll-like receptor 2，TLR2）mRNA、MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）p65、p-NF-κB p65表達(dá)水平。結(jié)果 模型組和納美芬A、B、C、D組均可見不同程度的肺泡間隔破壞，肺間質(zhì)水腫明顯、間質(zhì)內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤和紅細(xì)胞滲出，部分肺泡萎陷。在濕/干重比值、肺組織損傷評分、MPO活性和TNF-α、TLR2 mRNA和MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α表達(dá)水平等方面，模型組各檢測值均顯著高于假手術(shù)組（均P<0.01）；納美芬D組各檢測值與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），納美芬缺血后處理各組相應(yīng)檢測值呈現(xiàn)納美芬D組>納美芬C組>納美芬B組>納美芬A組的特點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 納美芬減輕肺缺血–再灌注損傷與抑制TLR2、MyD88、NF-κB p65表達(dá)和NF-κB p65磷酸化，減輕炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，此作用可能存在給藥時間–效應(yīng)性特點。
目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞炎癥模型, 探討NF-κB p65 基因在炎癥誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷中的作用。方法 以腫瘤壞死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 細(xì)胞, 運用RNA 干擾技術(shù)沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法檢測沉默效率, ELISA 法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎癥因子濃度, 比色法檢測細(xì)胞內(nèi)丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 濃度, MTT 法檢測細(xì)胞存活率。結(jié)果 TNF-α刺激A549 細(xì)胞可在基因及蛋白水平上調(diào)NF-κB p65 的表達(dá), 并增加NF-κB 蛋白的核轉(zhuǎn)位; 同時細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的濃度升高, 細(xì)胞內(nèi)MDA 增多, SOD 減少, 細(xì)胞存活率降低。預(yù)轉(zhuǎn)染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表達(dá), 降低TNF-α誘導(dǎo)的上述各炎癥因子及MDA 濃度的增高, 減少SOD 的耗損, A549 細(xì)胞存活率升高( Plt;0.05) 。結(jié)論 NF-κB 能介導(dǎo)TNF-α觸發(fā)的過度炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激, 導(dǎo)致細(xì)胞存活率明顯降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下調(diào)炎癥反應(yīng)水平及其誘發(fā)的氧化應(yīng)激, 減輕肺結(jié)構(gòu)細(xì)胞的損傷。