目的 觀察光照后人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞趨化因子受體3（CCR3）配體嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（eotaxin）-1、eotaxin-2、eotaxin-3的表達(dá)。方法 體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，取第5~10代生長狀態(tài)良好的傳代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將同代細(xì)胞隨機(jī)分為光照干預(yù)組與正常對照組。采用15 W藍(lán)色熒光燈自制光照器，以（600plusmn;100） Lux的強(qiáng)度對光照干預(yù)組細(xì)胞持續(xù)光照12 h，對照組細(xì)胞采用雙層高壓消毒錫紙包裹。隨后兩組細(xì)胞均置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，并于光照結(jié)束后0、3、6、12、24 h終止細(xì)胞培養(yǎng)。采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白免疫印跡法分別檢測eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果 光照干預(yù)組細(xì)胞eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA 和蛋白表達(dá)均隨培養(yǎng)時(shí)間延長呈上升趨勢，其中eotaxin-3 mRNA和蛋白表達(dá)增加最為明顯。光照干預(yù)組與正常對照組比較，光照結(jié)束后0（t1=6.05，t2=12.561）、3（t1=2.95，t2=3.67） h時(shí)eotaxin-1、eotaxin-2 mRNA表達(dá)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），eotaxin-3 mRNA表達(dá)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t3=1.57、1.00，P＞0.05）；光照結(jié)束后6（t1=4.73，t2=18.64，t3=28.48）、12（t1=3.11，t2=20.62，t3=18.50）、24 （t1=8.25，t2=38.27，t3=18.60）h時(shí)eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA表達(dá)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。光照干預(yù)組與正常對照組比較，除光照結(jié)束后3 h時(shí)eotaxin-3 蛋白表達(dá)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（t3=1.28，P＞0.05）；光照結(jié)束后0（t1=4.85，t2=5.45，t3=6.21）、3 h（t1=5.64，t2=4.55）、6（t1=31.60，t2=6.63，t3=7.15）、12（t1=14.09，t2=18.22，t3=15.76）、24（t1=6.96，t2=10.47，t3=12.85） h 時(shí)eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 蛋白表達(dá)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 光照后人RPE細(xì)胞CCR3配體eotaxin-1、eotaxin-2 、eotaxin-3 mRNA和蛋白表達(dá)均隨培養(yǎng)時(shí)間延長呈上升趨勢，以eotaxin-3表達(dá)增加最為突出。
目的 觀察藍(lán)光照射對人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞L-型鈣通道m(xù)RNA表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)的第4代人RPE細(xì)胞按隨機(jī)數(shù)字表法分為無光照組、光照組、光照+硝苯地平組和光照+（-）BayK8644組。（2000plusmn;500）Lux藍(lán)光照射6 h，終止細(xì)胞培養(yǎng)24 h。光照前加入硝苯地平和（-）BayK8644，濃度均為1times;10-5 mmol/L。熒光定量聚合酶鏈（PCR）技術(shù)檢測各組人RPE細(xì)胞L-型鈣通道alpha;1C亞型、alpha;1D亞型和alpha;1F亞型mRNA的表達(dá)。結(jié)果 熒光定量PCR產(chǎn)物alpha;1C、alpha;1D、alpha;1F和內(nèi)參beta;-肌動(dòng)蛋白的cDNA逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別為68、157、125、186堿基對，產(chǎn)物的凝膠電泳結(jié)果顯示擴(kuò)增條帶位置與以上片段相吻合。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)均高于光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)高于光照+硝苯地平組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達(dá)與光照組和光照+硝苯地平組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組與光照組alpha;1D mRNA的表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達(dá)均高于光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 藍(lán)光照射可引起人RPE細(xì)胞L-型鈣通道中alpha;1C、alpha;1D及alpha;1F亞型mRNA表達(dá)不同程度的增高；1times;10-5 mmol/L硝苯地平不能對抗藍(lán)光對RPE細(xì)胞L-型鈣通道作用，而1times;10-5 mmol/L（-）Bay K8644可以增加以上3個(gè)亞基的表達(dá)。
目的 觀察光損傷后人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子A（VEGF-A）及其受體可溶性fm樣酪氨酸激酶受體（sFlt-1）和包含激酶植入?yún)^(qū)域受體（KDR）的表達(dá)。方法 體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，取第8~12代生長良好的傳代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將同代細(xì)胞隨機(jī) 分為對照組和光損傷組。以18 W冷白色熒光燈作為光源，自制光照器。采用雙層高壓消毒錫紙包裹對照組細(xì)胞，與光損傷組細(xì)胞一同置于自制光照器下，控制光照強(qiáng)度在（2200±300） Lux，持續(xù)光照12 h建立光損傷模型。于光損傷后0、6、12、24 h終止培養(yǎng)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測VEGF-A、sFlt-1及KDR 的mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果 光損傷組VEGF-A mRNA及蛋白表達(dá)在光損傷后6 h時(shí)明顯增加，12 h時(shí)達(dá)到高峰，明顯高于對照組（t=2.74，2.93；P＜0.05），隨后降低。sFlt-1的mRNA及蛋白表達(dá)在光損傷后12 h達(dá)到高峰，明顯高于對照組（t=4.32，P＜0.01）；24 h時(shí) 明顯低于對照組（t=2.41，P＜0.05）。KDR的mRNA及蛋白表達(dá)在光損傷后6、12 h時(shí)較對照組無明顯變化(t=1.84，P＞0.05)，24 h時(shí)高于對照組（t=2.89，P＜0.05）。 〖HTH〗結(jié)論光損傷后6、12 h時(shí)，RPE細(xì)胞VEGF-A及sFlt-1的表達(dá)明顯增高，KDR的表達(dá)相對穩(wěn)定。光損傷后24 h時(shí)，RPE細(xì)胞VEGF-A及sFlt-1的表達(dá)降低，KDR的表達(dá)增高。
目的 觀察持續(xù)頻閃光刺激對發(fā)育敏感期豚鼠視網(wǎng)膜組織及功能的影響。方法 24只出生日齡14 d的豚鼠隨機(jī)分為頻閃組和對照組，每組均為12只。頻閃組使用頻閃調(diào)光器以0.5 Hz頻率等時(shí)交替頻閃，照度波動(dòng)0～500 Lux；對照組給予500 Lux照明。2組均使用500 nm波長發(fā)光二極管，控制光照時(shí)間為晝夜12 h輪替。實(shí)驗(yàn)第12周所有豚鼠行眼底彩色照相和閃光視網(wǎng)膜電圖（F-ERG）檢查。檢查結(jié)束后摘除眼球，測量眼球水平徑、垂直徑及前后徑3條徑線，光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察眼球后極部結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果 與對照組比較，頻閃組豚鼠眼底漆裂紋樣改變更為明顯，ERG a波潛伏期延長；眼球水平徑、垂直徑及前后徑分別較對照組增加（0.89plusmn;0.30）、（0.69plusmn;0.20）、（0.96plusmn;0.30） mm，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.7、11.9、15.8，P＜0.05）。光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，頻閃組豚鼠鞏膜纖維出現(xiàn)擴(kuò)張；透射電子鏡顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，視網(wǎng)膜感光細(xì)胞層外段排列稀疏紊亂并可見大量脫落外節(jié)盤膜。結(jié)論 持續(xù)頻閃光刺激會(huì)誘導(dǎo)豚鼠眼球產(chǎn)生過度發(fā)育，并會(huì)影響視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)與傳導(dǎo)功能。
目的 觀察藍(lán)光照射后大鼠視網(wǎng)膜中alpha;A和alpha;B晶體蛋白的表達(dá)。方法 40只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組，藍(lán)光照射6、12、24 h組共4組，每組10只。正常對照組不給予任何處理，藍(lán)光照射6、12、24 h組分別給予藍(lán)光照射6、12、24 h后給予12 h暗適應(yīng)，麻醉后摘取眼球。采用免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)法檢測視網(wǎng)膜中alpha;A和alpha;B晶體蛋白表達(dá)。結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色檢測顯示，正常對照組以及藍(lán)光照射6、12、24 h組視網(wǎng)膜alpha;A晶體蛋白吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值分別為1.405 73plusmn;0.707 48、4.317 51plusmn;0.412 97、7.397 08plusmn;1.947 90、9.634 32plusmn;2.377 61，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.569，P＜0.001）。正常對照組以及藍(lán)光照射6、12、24 h組視網(wǎng)膜alpha;B晶體蛋白A值分別為0.129 36plusmn;0.033 93、0.507 17plusmn;0.117 55、7.345 43plusmn;2.292 97、4.042 26plusmn;3.890 23，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=40.102，P＜0.001）。Western blot 檢測發(fā)現(xiàn)，藍(lán)光照射6、12、24 h后視網(wǎng)膜alpha;A-及alpha;B-晶體蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組。結(jié)論 藍(lán)光可誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜alpha;A-晶體蛋白和alpha;B-晶體蛋白表達(dá)上調(diào)。
目的 觀察670 nm近紅外光對SD大鼠的視網(wǎng)膜光損傷模型是否具有保護(hù)作用。方法 將32只SD大鼠分成8組，1組為正常對照組； 2組為紅外光對照組； 3、5、7組為光損傷組；第4、6、8組為光損傷加近紅外光保護(hù)組。光損傷劑量為900，1800，2700 lx白光，持續(xù)照射3 h；在光損傷前3 h和光損傷后0、24、48 h，保護(hù)組先后4次給予50 mW近紅外光照射30 min。光損傷后第5天將大鼠置于暗室過夜，第6天作視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測，并取眼球作病理檢查。結(jié)果 1組和2組視網(wǎng)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，外核層細(xì)胞約11層，ERG b波振幅（1088plusmn;55）mu;V。3組和4組900 lx白光持續(xù)照射3 h，未造成大鼠視網(wǎng)膜的損傷。5組1800 lx白光持續(xù)照射3 h，外核層細(xì)胞的減少至1～2層，內(nèi)節(jié)（IS）與外節(jié)（OS）結(jié)構(gòu)完全消失；損傷范圍占全視網(wǎng)膜的0.48plusmn;0.12，損傷厚度占外核層全厚的L5=0.39plusmn;0.07，ERG的b波低伏（431plusmn;120 ）mu;V。6組在1800 Lux白光照射前后實(shí)施近紅外光保護(hù)，視網(wǎng)膜損傷范圍縮小為M6=0.17plusmn;0.12, （P5/6=0.002)；損失厚度減少到L6=0.22plusmn;0.09 (P5/6lt;0.01）；ERG b波振幅升高到（1011plusmn;83）mu;V（P5/6lt;0.001）。2700 lx白光持續(xù)照射3 h，7組和8組病理和ERG檢查的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［損傷面積:M7=0.83plusmn;0.09, M8=0.70plusmn;0.10, P7/8=0.074；損傷厚度L7=0.81plusmn;0.08, L8=0.73plusmn;0.08, P=0.17；ERG：H7=（234plusmn;26）mu;V，H8=（253plusmn;29）mu;V，P7/8gt;0.05］。結(jié)論 在一定的照射強(qiáng)度和時(shí)間范圍內(nèi)，670 nm近紅外光對大鼠視網(wǎng)膜光損傷有明確的保護(hù)作用。
目的 觀察視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞中黑色素含量與光感受器細(xì)胞功能之間的關(guān)系，探討黑色素對視網(wǎng)膜光損傷的作用。方法 老齡多巴色素異構(gòu)酶敲除小鼠（Dct-/-小鼠）和C57BL/6小鼠（野生型小鼠）各20只，分別為Dct-/-小鼠組和野生型小鼠組。采用臨床電生理國際標(biāo)準(zhǔn)分別對各型鼠進(jìn)行視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢查，記錄其最大混合反應(yīng)后各組隨機(jī)處死2只小鼠，摘除眼球作為陰性對照。余下每組各18只小鼠，將6只小鼠用20 W冷熒光燈行12 h明、12 h暗、12 h明的間斷光照36 h，連續(xù)3個(gè)循環(huán)。光照強(qiáng)度為（5000plusmn;356） lx。光照結(jié)束后第6天再次進(jìn)行ERG檢查，記錄ERG結(jié)果。隨機(jī)頸椎脫臼法處死每組各2只小鼠，摘除眼球。所有摘除眼球常規(guī)組織切片，光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察。結(jié)果 ERG檢查結(jié)果顯示，光損傷前后Dct-/-小鼠a、b波振幅明顯低于野生型小鼠（ta波光照前=-7.13，P＜0.01；tb波光照前=-4.414，P＜0.01；ta波光照后=-10.162，P＜0.01；tb波光照后=-6.772，P＜0.01）；光損傷后Dct-/-小鼠ERG a、b波的振幅下降幅度明顯高于野生型小鼠（ta波=4.975,P＜0.01；tb波=2.908,P＜0.01）。光損傷后，光學(xué)顯微鏡檢查可見Dct-/-小鼠視網(wǎng)膜水腫、變薄，較野生型明顯；電子顯微鏡檢查可見RPE細(xì)胞中黑色素顆粒融解、斷裂或丟失，光感受器細(xì)胞外節(jié)盤膜腫脹、碎裂及空泡變，Dct-/-小鼠損傷較野生型小鼠嚴(yán)重。結(jié)論 光損傷后RPE細(xì)胞黑色素含量減少，光感受器細(xì)胞功能下降，提示黑色素對光損傷可能有保護(hù)作用。
目的 探討藍(lán)光光照強(qiáng)度、時(shí)間與大鼠視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞復(fù)制衰老的關(guān)系。方法 將36只鼠齡12~14周的Wistar大鼠置于懸有波長為（450plusmn;10） nm的醫(yī)用藍(lán)光燈管的自制光照架中。隨機(jī)分為4組，每組9只大鼠，1組：無光照對照組；2組：自然光照組；3組：500 lx光照組；4組：1000 lx光照組。每組按照照射時(shí)間再分為1、2、3個(gè)月組3個(gè)亞組，分別在1、2、3個(gè)月時(shí)行10％水合氯醛腹腔注射麻醉后取出眼球，將右眼球行石蠟切片，蘇木精伊紅（HE）染色；左眼球行冰凍切片，采用衰老相關(guān)beta;半乳糖苷酶（SA-beta;-Gal）染色方法觀察RPE細(xì)胞染色陽性情況。采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 不同光照強(qiáng)度組、不同光照時(shí)間組大鼠RPE 細(xì)胞SA-beta;-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝510.309，55.016；P＝0.000）；組間兩兩比較，除1組與2組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P＝0.154），其它各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）。在單一光照強(qiáng)度條件下，除1組大鼠RPE細(xì)胞SA-beta;-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P=0.897）,其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在單一時(shí)間條件下，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）。結(jié)論 同一藍(lán)光光照強(qiáng)度下，隨著時(shí)間的增加大鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞逐漸出現(xiàn)復(fù)制衰老改變;同一時(shí)間條件下，隨光照強(qiáng)度增加大鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞也逐漸出現(xiàn)復(fù)制衰老改變。
目的 應(yīng)用二維電泳法觀察光損傷后視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)組的表達(dá)。 方法 運(yùn)用冷白光以（2200plusmn;300）Lx光照人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(ARPE19)6 h，建立光損傷模型；提取細(xì)胞可溶性蛋白并通過二維電泳分離和凝膠圖像分析，尋找光損傷細(xì)胞的蛋白質(zhì)譜變化。 結(jié)果 軟件分析顯示全細(xì)胞可溶性蛋白在圖譜上出現(xiàn)（390plusmn;10）個(gè)清晰斑點(diǎn),11個(gè)蛋白斑點(diǎn)有明顯表達(dá)差異。光損傷細(xì)胞內(nèi)8種蛋白表達(dá)上調(diào),1種下調(diào)，2種蛋白表達(dá)缺失。 討論 二維電泳實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘页龉鈸p傷RPE細(xì)胞與正常細(xì)胞的蛋白表達(dá)差異，為進(jìn)一步研究在此改變中發(fā)揮重要作用的蛋白質(zhì)奠定基礎(chǔ)。