目的 觀察藏紅花素對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷（RIR）大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)及腫瘤壞死因子-alpha;（TNF-alpha;）、白細(xì)胞介素-1beta;（IL-1beta;）表達(dá)的影響。方法 采用隨機(jī)數(shù)字表法將80只8~10周齡健康無眼疾Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、藏紅花素低劑量組和藏紅花素高劑量組，每組20只。正常對(duì)照組大鼠不作任何處理。其余組采用前房灌注生理鹽水升高眼內(nèi)壓法建立RIR模型。藏紅花素低劑量組、藏紅花素高劑量組均于建模前30 min和建模后每天定時(shí)分別以5 mg/kg、50 mg/kg的劑量腹腔注射藏紅花素溶液。建模后6、12、24、48 h，作視網(wǎng)膜石蠟切片行蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)；作視網(wǎng)膜組織勻漿，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定各組TNF-alpha;、IL-1beta;的表達(dá)。結(jié)果 光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)正常；模型組大鼠出現(xiàn)視網(wǎng)膜水腫、結(jié)構(gòu)紊亂、細(xì)胞排列疏松等病理改變；藏紅花素低劑量組大鼠視網(wǎng)膜病理改變程度較模型組輕；藏紅花素高劑量組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組相似。TNF-alpha;在建模后24 h表達(dá)量最高，IL-1beta;在建模后12、48 h時(shí)表達(dá)量最高。建模后6、12、24、48 h，模型組（t=5.42、7.94、9.32、9.18）、藏紅花素低劑量組（t=3.94、4.12、4.98、3.84）TNF-alpha;表達(dá)均較正常對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；藏紅花素高劑量組TNF-alpha;表達(dá)較正常對(duì)照組有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.13、2.34、2.96、2.78，P＞0.05）。與模型組比較，藏紅花素低劑量組（t=3.95、4.56、4.01、5.12）、藏紅花素高劑量組（t=5.23、7.65、7.74、7.63）TNF-alpha;表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。建模后6、12、24、48 h，模型組（t=7.23、7.87、7.15、15.60）、藏紅花素低劑量組（t=5.65、5.10、5.54、6.87）、藏紅花素高劑量組（t=4.38、5.21、4.56、4.75）IL-1beta;表達(dá)均較正常對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，藏紅花素低劑量組僅于建模后48 h降低最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.56，P＜0.05）；各時(shí)間點(diǎn)藏紅花素高劑量組IL-1beta;表達(dá)均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.94、5.36、6.05、10.50，P＜0.05）。結(jié)論 藏紅花素可以改善RIR大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)的病理改變，降低TNF-alpha;、IL-1beta;的表達(dá)
目的 觀察不同濃度白細(xì)胞介素-1beta;(IL-1beta;)對(duì)大鼠視網(wǎng)膜Muuml;ller細(xì)胞磷酸化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(pSTAT3)表達(dá)的影響。方法 將體外培養(yǎng)的Sprague-Dawley（SD）大鼠Muuml;ller細(xì)胞分別以0.0、0.1、1.0、5.0、10.0 ng/ml濃度的IL-1beta;刺激24 h后，免疫熒光法和蛋白質(zhì)印跡（Western botting）檢測細(xì)胞內(nèi)pSTAT3的表達(dá)改變。SD大鼠32只，隨機(jī)分為對(duì)照組、100、500、1000 ng/ml組，每組均為8只大鼠。分別將磷酸緩沖液（PBS）配制的濃度分別為100、500、1000 ng/ml的 IL-1beta;注入大鼠的左眼玻璃體腔中，對(duì)照組大鼠左眼玻璃體腔注射相同容積的PBS，24 h后采用同樣方法檢測pSTAT3在視網(wǎng)膜的表達(dá)情況。結(jié)果 免疫熒光法和Western botting檢測結(jié)果顯示，IL-1beta;刺激24 h后，IL-1beta;濃度為0.0 ng/ml時(shí)，pSTAT3在細(xì)胞核內(nèi)有極少量表達(dá)，當(dāng)濃度達(dá)到1.0 ng/ml后，pSTAT3在細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)隨濃度增加而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=46.64，43.78；P＜0.01）。對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)無明顯pSTAT3的表達(dá)，當(dāng)濃度達(dá)到100.0 ng/ml后，pSTAT3在視網(wǎng)膜內(nèi)的表達(dá)隨濃度增加而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=73.53，43.70；P＜0.01）；pSTAT3主要表達(dá)于內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層。雙熒光標(biāo)記顯示，對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)無pSTAT3表達(dá)，膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）主要表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，并向視網(wǎng)膜色素上皮層呈絲狀放射；從100 ng/ml IL-1beta;刺激24 h后起，內(nèi)核層就出現(xiàn)顆粒狀GFAP和pSTAT3的雙標(biāo)染色。結(jié)論 IL-1beta;可以上調(diào)Muuml;ller細(xì)胞pSTAT3的表達(dá)，這可能是Muuml;ller細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)性膠質(zhì)活化的通路之一。
目的 研究轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-beta;2是否能促進(jìn)體外培養(yǎng)的鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的分化及其作用的強(qiáng)弱。 方法 小鼠胚胎在解剖顯微鏡下分離視網(wǎng)膜干細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)，傳代，nestin和chx-10免疫熒光鑒定；將第六代細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化， 并進(jìn)行抗膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、抗opsin、抗b-tubulin、抗蛋白激酶C（PKC）免疫熒光染色，鑒定終末細(xì)胞。 結(jié)果 培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)TGF-beta;2誘導(dǎo)可向成熟細(xì)胞分化, 免疫熒光檢測顯示分化細(xì)胞的數(shù)量較胎牛血清誘導(dǎo)的分化細(xì)胞數(shù)量多。 結(jié)論 TGF-beta;2能誘導(dǎo)視網(wǎng)膜干細(xì)胞分化為視網(wǎng)膜細(xì)胞；其誘導(dǎo)分化作用強(qiáng)于單獨(dú)的血清誘導(dǎo)。 (中華眼底病雜志, 2007, 23: 104-107)
目的 觀察結(jié)締組織生長因子（CTGF）在不同級(jí)別增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）增生膜中的表達(dá)及其與轉(zhuǎn)化生長因子beta;受體（TGF-beta;R）和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）出現(xiàn)的關(guān)系，探討PVR發(fā)病過程中CTGF與TGF-beta;R和ECM產(chǎn)生的相關(guān)性。 方法 采用鏈霉親和素生物素復(fù)合物（SABC）免疫組織化學(xué)方法，檢測玻璃體切除手術(shù)獲得的43例PVR增生膜中CTGF、TGF-beta;RⅡ、纖維連接蛋白（FN）和Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)，應(yīng)用Spearman相關(guān)分析判斷兩樣本之間有無相關(guān)性。 結(jié)果 PVR增生膜中CTGF、TGF-beta;RⅡ蛋白高表達(dá)，陽性表達(dá)的細(xì)胞主要是上皮樣細(xì)胞。免疫組織化學(xué)顯示C級(jí)膜中二者陽性表達(dá)率分別為70.6%和76.5%，D級(jí)膜中分別為73.9%和69.6%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，CTGF、TGF-beta;RⅡ各級(jí)陽性表達(dá)率與膜分級(jí)間無相關(guān)性（P＞0.05）。PVR膜中FN、Ⅰ型和Ⅲ型膠原染色在實(shí)質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外間質(zhì)均有表達(dá);統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，CTGF與TGF-beta;RⅡ、FN、Ⅰ型及Ⅲ型膠原的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.01)。 結(jié)論 PVR增生膜中CTGF、TGF-beta;RⅡ蛋白表達(dá)上調(diào)，推測CTGF的產(chǎn)生與TGF-beta;R的激活有關(guān)，CTGF加重增生膜中RPE細(xì)胞合成FN和膠原等ECM，參與了PVR增生膜的形成和發(fā)展。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 192-195)
目的 了解轉(zhuǎn)化生長因子beta;2（TGFbeta;2）和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）調(diào)節(jié)人胚胎視網(wǎng)膜色素上皮（hfRPE）細(xì)胞向肌纖維母細(xì)胞分化的作用，確定這種調(diào)節(jié)的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。 方法 hfRPE細(xì)胞培養(yǎng)于由ECM包被或未包被的培養(yǎng)皿上，培養(yǎng)液中加入或不加入TGFbeta;2，用免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞儀、蛋白印跡技術(shù)檢測alpha;平滑肌機(jī)動(dòng)蛋白（alpha;-SMA）的表達(dá)。在培養(yǎng)液中分別加入calphostin C, 染料木黃銅（genistein）, PD98059和渥曼青霉素（Wortmannin），測定alpha;-SMA的表達(dá)。 結(jié)果 hfRPE細(xì)胞培養(yǎng)于ECM包被的培養(yǎng)板上，培養(yǎng)液中加入TGFbeta;2后，出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變，包括細(xì)胞伸展變長，可見肌動(dòng)蛋白微絲的形態(tài)。流式細(xì)胞儀及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示，培養(yǎng)液中加入TGFbeta;2可明顯增加alpha;-SMA的表達(dá)，并與劑量成正相關(guān)。當(dāng)TGFbeta;2 的刺激濃度為50 ng/ml時(shí)，與培養(yǎng)于未包被的培養(yǎng)板上的hfRPE細(xì)胞相比，用纖維連接蛋白（FN）包被培養(yǎng)板后，〖JP1〗總的平均熒光強(qiáng)度（TMFI）增加（38.01plusmn;1.14）%（Plt;0.05）。蛋白印跡技術(shù)檢測顯示同樣的結(jié)果。而上述效應(yīng)可以大部分被蛋白激酶C（PKC）通路抑制劑calphostin C（10 nmol/L）抑制（Plt;0.01）。 結(jié)論 TGFbeta;2可誘導(dǎo)hfRPE細(xì)胞向肌纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并與其劑量成正相關(guān)，這種作用可被FN加強(qiáng)。TGFbeta;2和ECM的這種調(diào)節(jié)作用可能是通過PKC細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路而發(fā)揮作用 。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 328-332)
本文旨在研究川芎嗪及大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF) miRNA質(zhì)粒對(duì)高糖刺激大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)的CTGF和轉(zhuǎn)化生長因子-beta (TGF-beta) mRNA表達(dá)量、蛋白表達(dá)量及Ⅰ型膠原表達(dá)量的作用。首先體外培養(yǎng)大鼠HSC以及穩(wěn)定表達(dá)大鼠CTGF miRNA和穩(wěn)定表達(dá)陰性質(zhì)粒的大鼠HSC,高糖及川芎嗪作用后提取總RNA、總蛋白及收集細(xì)胞上清液,檢測川芎嗪及大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒對(duì)高糖刺激HSC的CTGF、TGF-beta及Ⅰ型膠原表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高糖導(dǎo)致HSC的CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型膠原表達(dá)量增加(P＜0.05)。川芎嗪組CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型膠原的表達(dá)量較高糖組低(P＜0.05)。大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒干擾組CTGF mRNA、CTGF蛋白、TGF-beta mRNA、TGF-beta蛋白及Ⅰ型膠原的表達(dá)量較高糖組低(P＜0.05)。川芎嗪組與大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒干擾組相比,CTGF mRNA及CTGF蛋白的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),川芎嗪組Ⅰ型膠原的表達(dá)量明顯低于大鼠CTGF miRNA質(zhì)粒干擾組(P＜0.05)。因此,高糖可刺激CTGF、TGF-beta、Ⅰ型膠原的表達(dá),而川芎嗪、大鼠CTGF miRNA質(zhì)?？蓪?dǎo)致CTGF、TGF-beta、Ⅰ型膠原的表達(dá)量下降。
目的 觀察2型糖尿?。═2DM）患者血清中betatrophin水平，初步探討betatrophin在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）發(fā)病過程中的作用。 方法 臨床檢查確診的T2DM患者59例（DM組）和同期健康對(duì)照者14名（NC組）納入研究。均行視力、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、熒光素眼底血管造影檢查。根據(jù)檢查結(jié)果同時(shí)結(jié)合國際DR臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為無DR（Non-DR）組、非增生型DR（NPDR）組、增生型DR（PDR）組，分別為30、20、9例。測定受試者空腹血糖（FPG）、胰島素（FIN）、C肽、糖化血紅蛋白（HbA1c）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清中betatrophin水平。Betatrophin與其他指標(biāo)之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。PDR的影響因素采用logistic回歸分析。 結(jié)果 與NC組受試者比較，DM組患者空腹FPG（F=?4.316，P＜0.001）、FIN（t=2.142，P=0.001）、HbA1c（F=?5.726，P＜0.001）、TC（t=3.609，P=0.010）、LDL-C（t=0.000，P=0.003）、betatrophin水平（F=?2.263，P=0.024）顯著升高，HDL-C水平（F=?3.924，P＜0.001）顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=?1.422，P=0.155）。與Non-DR組、NPDR組比較，PDR組患者血清C肽（F=7.818，P=0.020）、betatrophin水平（F=12.141，P=0.002）顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，DM組、Non-DR組、PDR組患者betatrophin水平分別與TC（r=0.304，P=0.019）、體重指數(shù)（r=0.513，P=0.004）、舒張壓（r=0.685，P=0.042）呈顯著正相關(guān)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，病程及血清C肽、betatrophin水平是發(fā)生PDR的危險(xiǎn)因素。在病程和C肽不變的情況下，betatrophin水平≥1.0 ng/ml者PDR發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)較betatrophin水平＜1.0 ng/ml者增加了12倍。 結(jié)論 T2DM患者血清betatrophin水平明顯異常；betatrophin可能參與了PDR的發(fā)生、發(fā)展。
目的 通過分析高原居住的藏族靜脈血栓栓塞癥(VTE)患者的臨床資料,了解藏族VTE患者的危險(xiǎn)因素、發(fā)病特點(diǎn)以及預(yù)后情況。方法 納入2010年1月至2012年12月四川大學(xué)華西醫(yī)院經(jīng)CTPA或血管彩超檢查明確診斷的DVT或PE的長期高原居住的VTE藏族患者,回顧性調(diào)查患者的VTE危險(xiǎn)因素,分析其臨床癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果,并電話隨訪。結(jié)果 31例VTE患者中男16例,女15例;危險(xiǎn)因素分析顯示15例患者(48.3%)有肥胖體質(zhì),10例患者(32.3%)有高粘血癥。常見臨床癥狀依次為呼吸困難9例(29%),胸痛6例(19.4%),咯血5例(16.1%)和咳嗽咳痰4例(12.9%)。常見體征為下肢水腫22例(73.3%)和肺部啰音11例(36.7%)。所有患者均接受了抗凝治療,其中2例給予安置下腔靜脈濾器治療。出院后2年隨訪結(jié)果顯示31例患者中有4例患者死亡,2例死于腫瘤,2例死于PE;6例DVT病員出現(xiàn)患側(cè)下肢間斷性水腫、疼痛,1例出現(xiàn)肺栓塞后肺動(dòng)脈高壓,20例患者血栓消失或機(jī)化再通,且未再出現(xiàn)VTE復(fù)發(fā)。結(jié)論 藏族患者長期居住高海拔地區(qū),且飲食習(xí)慣多為高脂飲食,增加了高粘血癥及肥胖等VTE獲得性危險(xiǎn)因素。藏族VTE患者的臨床癥狀及體征無特異性,呼吸困難是最常見癥狀,下肢水腫為最常見體征。危險(xiǎn)因素短期內(nèi)可消除的VTE患者預(yù)后較好。
目的 研究巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1β（MIP-1β）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）各病理類型中表達(dá)及其與腫瘤的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增38例新鮮NSCLC癌組織標(biāo)本MIP-1β mRNA，半定量分析各病理類型MIP-1β基因表達(dá)水平。用免疫組化法（IHC）對(duì)66例NSCLC石蠟肺組織標(biāo)本的MIP-1β進(jìn)行檢測，并通過著色面積和著色程度評(píng)估陽性率；比較不同病理類型、TNM分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中MIP-1β蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 MIP-1β mRNA表達(dá)在鱗癌和腺癌間比較無顯著差異（1.23±0.29和1.25±0.26），但均顯著高于支氣管肺泡細(xì)胞癌（0.86±0.03）。在肺鱗癌和腺癌的大多數(shù)癌細(xì)胞胞漿中有MIP-1β蛋白表達(dá)，在支氣管肺泡細(xì)胞癌無明顯表達(dá)；MIP-1β蛋白表達(dá)陽性率在腺癌和鱗癌無顯著差異（69.7%比58.6%）。MIP-1β蛋白在NSCLC不同TNM分期中的表達(dá)陽性率分別為Ⅰ期74.2%、Ⅱ期29.4%、Ⅲ期85.7%，Ⅰ期和Ⅲ期比較無顯著差異（Pgt;0.05），但二者陽性率均顯著高于Ⅱ期（Plt;0.05）。MIP-1β在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤中表達(dá)陽性率分別為45.8%和76.3%，二者有顯著差異。結(jié)論 MIP-1β可在肺癌腫瘤細(xì)胞表達(dá)，并與腫瘤的病理類型、TNM分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。
目的 研究下呼吸道感染（LRTI）患者外周血β-防御素2（HBD-2）與全身炎癥反應(yīng)的關(guān)系。方法 LRTI組納入81例患者，包括社區(qū)獲得性肺炎、COPD急性加重或（和）合并肺部感染、支氣管擴(kuò)張合并感染。同期20例健康人作為對(duì)照組。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定外周血HBD-2、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）和IL-8水平。常規(guī)進(jìn)行血細(xì)胞分析等實(shí)驗(yàn)室檢查。比較LRTI組及對(duì)照組上述指標(biāo)的變化。按照采血時(shí)患病時(shí)間分為lt;7 d組、7~14 d組和gt;14 d組，比較組間差別。對(duì)HBD-2與IL-1β、IL-8進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果 LRTI組患者外周血HBD-2、IL-1β和白細(xì)胞總數(shù)（WBC）顯著高于對(duì)照組（P均lt;0.05）。LRTI患者在患病時(shí)間lt;7 d組和7~14 d組的HBD-2和IL-1β水平均顯著高于對(duì)照組（P均lt;0.05），gt;14 d組患者的HBD-2和IL-1β基本恢復(fù)正常（P均gt;0.05）。不同患病時(shí)間的LRTI患者IL-8水平?jīng)]有顯著差異（P均gt;0.05）。外周血HBD-2與IL-1β呈顯著的正相關(guān)（r=0.313，P=0.030）；HBD-2與IL-8無顯著相關(guān)性（Pgt;0.05）。結(jié)論 LRTI患者外周血HBD-2明顯升高；HBD-2升高主要表現(xiàn)在疾病早期或相對(duì)早期；外周血HBD-2升高可能與全身炎癥反應(yīng)有關(guān)。